Η παθολογική πρωτεϊνουρία είναι ένα από τα σημαντικότερα και μόνιμα σημάδια ασθενειών των νεφρών και των ουροφόρων οδών. Ο προσδιορισμός της συγκέντρωσης πρωτεΐνης των ούρων είναι ένα βασικό και σημαντικό στοιχείο των εξετάσεων ούρων. Η ταυτοποίηση και η ποσοτική αξιολόγηση της πρωτεϊνουρίας είναι σημαντική όχι μόνο στη διάγνωση πολλών πρωτοπαθών και δευτεροπαθών νεφρικών νόσων, η αξιολόγηση των αλλαγών στη σοβαρότητα της πρωτεϊνουρίας στη δυναμική μεταφέρει πληροφορίες σχετικά με την πορεία της παθολογικής διαδικασίας, την αποτελεσματικότητα της θεραπείας. Η ανίχνευση της πρωτεΐνης στα ούρα, ακόμη και σε ιχνοστοιχεία, θα πρέπει να είναι ανησυχητική για πιθανή νεφρική νόσο ή ουροδόχο κύκλο και απαιτεί επανεξέταση. Ιδιαίτερη σημασία έχει η άνευ ερεθισμάτων έρευνα των ούρων και, ειδικότερα, ο προσδιορισμός της πρωτεΐνης ούρων χωρίς να τηρούνται όλοι οι κανόνες συλλογής.

Όλες οι μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα μπορούν να χωριστούν σε:

• Ποιότητα,
• Ημιποσοτικά
• Ποσοτικά.

Ποιοτικές μέθοδοι

Όλα τα υψηλής ποιότητας δείγματα πρωτεϊνών ούρων βασίζονται στην ικανότητα των πρωτεϊνών να μετουσιώνουν υπό την επίδραση διαφόρων φυσικών και χημικών παραγόντων. Παρουσία πρωτεΐνης στο δείγμα ούρων, υπάρχει είτε θολερότητα είτε απώλεια κροκιδώδους ιζήματος.

Συνθήκες για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα με βάση την αντίδραση πήξης:

1. Τα ούρα πρέπει να είναι όξινα. Τα αλκαλικά ούρα οξινίζονται με αρκετές (2-3) σταγόνες οξικού οξέος (5-10%).
2. Τα ούρα πρέπει να είναι καθαρά. Η θολότητα εξαλείφεται μέσω ενός φίλτρου χαρτιού. Εάν η θολότητα δεν εξαφανιστεί, προσθέστε τάλκη ή καμένη μαγνησία (περίπου 1 κουταλάκι του γλυκού ανά 100 ml ούρων), ανακινήστε και διηθήστε.
3. Η ποιοτική δοκιμή θα πρέπει να διεξάγεται σε δύο σωλήνες, ένας από τους οποίους είναι ο έλεγχος.
4. Η αναζήτηση θολότητας πρέπει να είναι σε μαύρο φόντο σε μεταδιδόμενο φως.

Οι ποιοτικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα περιλαμβάνουν:

Όπως φαίνεται από πολυάριθμες μελέτες, κανένας από τον μεγάλο αριθμό γνωστών μεθόδων για τον ποιοτικό προσδιορισμό πρωτεΐνης στα ούρα δεν καθιστά δυνατή την επίτευξη αξιόπιστων και αναπαραγώγιμων αποτελεσμάτων. Παρόλα αυτά, στα περισσότερα CDL στη Ρωσία, αυτές οι μέθοδοι χρησιμοποιούνται ευρέως ως διαλογή - στα ούρα με θετική ποιοτική αντίδραση, η ποσοτικοποίηση πρωτεϊνών διεξάγεται περαιτέρω. Από τις ποιοτικές αντιδράσεις, χρησιμοποιούνται συχνότερα μια δοκιμασία Geller και ένα δείγμα με σουλφοσαλικυλικό οξύ · ωστόσο, ένα δείγμα με σουλφοσαλικυλικό οξύ θεωρείται ως το πλέον κατάλληλο για την ανίχνευση της παθολογικής πρωτεϊνουρίας. Η δοκιμή βρασμού δεν χρησιμοποιείται επί του παρόντος πρακτικά λόγω της επιμελότητας και της διάρκειας της.

Ημιποσοτικές μέθοδοι

Η μέθοδος Brandberg-Roberts-Stolnikov βασίζεται στη δοκιμή δακτυλίου Geller, έτσι τα ίδια σφάλματα παρατηρούνται με αυτήν τη μέθοδο όπως και με τη δοκιμή Geller.

Επί του παρόντος, διαγνωστικές ταινίες χρησιμοποιούνται όλο και περισσότερο για τον προσδιορισμό των πρωτεϊνών ούρων. Για τον ημι-ποσοτικό προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα σε μια λωρίδα, η συνηθέστερα χρησιμοποιούμενη χρωστική είναι μπλε βρωμοφαινόλης σε κιτρικό ρυθμιστικό διάλυμα. Η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες στα ούρα κρίνεται από την ένταση του μπλε-πράσινου χρώματος, που αναπτύσσεται μετά την επαφή της ζώνης αντίδρασης με τα ούρα. Το αποτέλεσμα αξιολογείται οπτικά ή χρησιμοποιώντας αναλυτές ούρων. Παρά τη μεγάλη δημοτικότητα και τα προφανή πλεονεκτήματα των μεθόδων ξηρής χημείας (απλότητα, ταχύτητα ανάλυσης), αυτές οι μέθοδοι προσδιορισμού ούρων γενικά και ο καθορισμός πρωτεϊνών ειδικότερα δεν είναι χωρίς σοβαρές ατέλειες. Ένας από αυτούς, που οδηγεί σε παραμόρφωση των διαγνωστικών πληροφοριών, είναι η μεγαλύτερη ευαισθησία του δείκτη κυανού βρωμοφαινόλης σε λευκωματίνη σε σύγκριση με άλλες πρωτεΐνες. Από την άποψη αυτή, οι δοκιμαστικές ταινίες προσαρμόζονται κυρίως στην ανίχνευση της εκλεκτικής σπειραματικής πρωτεϊνουρίας, όταν σχεδόν όλη η πρωτεΐνη ούρων αντιπροσωπεύεται από λευκωματίνη. Με την πρόοδο των μεταβολών και τη μετάβαση της εκλεκτικής σπειραματικής πρωτεϊνουρίας σε μη εκλεκτική (εμφάνιση σφαιρινών στα ούρα), τα αποτελέσματα του προσδιορισμού της πρωτεΐνης υποτιμούνται σε σύγκριση με τις πραγματικές τιμές. Αυτό το γεγονός καθιστά αδύνατη τη χρήση αυτής της μεθόδου για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα για να εκτιμηθεί η κατάσταση των νεφρών (σπειραματικό φίλτρο) με την πάροδο του χρόνου. Σε σωληνωτή πρωτεϊνουρία, τα αποτελέσματα προσδιορισμού πρωτεϊνών υποτιμώνται επίσης. Ο προσδιορισμός της πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας διαγνωστικές ταινίες δεν αποτελεί αξιόπιστο δείκτη χαμηλών επιπέδων πρωτεϊνουρίας (οι περισσότερες από τις διαθέσιμες διαγνωστικές ταινίες δεν έχουν την ικανότητα να συλλέγουν πρωτεΐνες στα ούρα σε συγκέντρωση μικρότερη από 0,15 g / l). Τα αρνητικά αποτελέσματα προσδιορισμού πρωτεϊνών σε λωρίδες δεν αποκλείουν την παρουσία στα ούρα σφαιρίνης, αιμοσφαιρίνης, ουρομυκητίτιδας, πρωτεΐνης Bens-Jones και άλλων παραπρωτεϊνών.

Οι νιφάδες βλέννας με υψηλή περιεκτικότητα σε γλυκοπρωτεΐνες (για παράδειγμα, σε φλεγμονώδεις διεργασίες στην ουροφόρο οδό, πυουρία, βακτηριουρία) μπορούν να εγκατασταθούν στη ζώνη ένδειξης της ταινίας και να οδηγήσουν σε ψευδώς θετικά αποτελέσματα. Τα ψευδή θετικά αποτελέσματα μπορεί επίσης να σχετίζονται με υψηλή συγκέντρωση ουρίας. Ο κακός φωτισμός και η κακή αντίληψη χρώματος μπορεί να προκαλέσουν ανακριβή αποτελέσματα.

Από την άποψη αυτή, η χρήση διαγνωστικών λωρίδων θα πρέπει να περιορίζεται στις διαδικασίες ελέγχου και τα αποτελέσματα που λαμβάνονται με τη βοήθειά τους θα πρέπει να θεωρούνται μόνο ενδεικτικά.

Ποσοτικές μέθοδοι

Ο σωστός ποσοτικός προσδιορισμός της πρωτεΐνης στα ούρα σε ορισμένες περιπτώσεις δεν είναι εύκολο έργο. Οι δυσκολίες της λύσης του καθορίζονται από τον ακόλουθο αριθμό παραγόντων:

• χαμηλή περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες στα ούρα ενός υγιούς ατόμου, συχνά στο κατώφλι ευαισθησίας των πιο γνωστών μεθόδων.
• η παρουσία στα ούρα πολλών ενώσεων που μπορούν να επηρεάσουν την πορεία των χημικών αντιδράσεων.
• σημαντικές διακυμάνσεις του περιεχομένου και της σύνθεσης των πρωτεϊνών ούρων σε διάφορες ασθένειες που καθιστούν δύσκολη την επιλογή ενός κατάλληλου υλικού βαθμονόμησης.

Στα κλινικά εργαστήρια χρησιμοποιούνται κατά κύριο λόγο οι λεγόμενες μέθοδοι ρουτίνας για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα, αλλά δεν παρέχουν πάντοτε ικανοποιητικά αποτελέσματα.

Από την άποψη ενός ειδικού αναλυτή που εργάζεται στο εργαστήριο, η μέθοδος που προορίζεται για τον ποσοτικό προσδιορισμό της πρωτεΐνης ούρων πρέπει να πληροί τις ακόλουθες απαιτήσεις:

• να έχουν μια γραμμική σχέση μεταξύ της απορρόφησης του συμπλόκου που σχηματίζεται κατά τη διάρκεια της χημικής αντίδρασης και της περιεκτικότητας πρωτεΐνης στο δείγμα σε ευρύ φάσμα συγκεντρώσεων, αποφεύγοντας έτσι τις πρόσθετες ενέργειες για την προετοιμασία του δείγματος για τη μελέτη.
• θα πρέπει να είναι απλή, να μην απαιτεί την εξαιρετικά εξειδικευμένο εκτελεστή, να εκτελείται με ένα μικρό αριθμό λειτουργιών?
• έχουν υψηλή ευαισθησία, αναλυτική αξιοπιστία όταν χρησιμοποιούν μικρές ποσότητες του υλικού που μελετάται.
• να είναι ανθεκτικά σε διάφορους παράγοντες (μεταβολές στη σύνθεση του δείγματος, παρουσία φαρμάκων κ.λπ.) ·
• έχουν αποδεκτό κόστος.
• να προσαρμόζεται εύκολα σε αυτόματους αναλυτές.
• το αποτέλεσμα του προσδιορισμού δεν πρέπει να εξαρτάται από τη σύνθεση πρωτεϊνών του δείγματος ούρων.

Καμία από τις σήμερα γνωστές μεθόδους για τον ποσοτικό προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα δεν μπορεί να ισχυριστεί πλήρως ότι είναι το "χρυσό πρότυπο".

Ποσοτικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα μπορούν να χωριστούν σε θολωσιμετρικό και χρωματομετρικό.

Στροβιλομετρικές μέθοδοι

Οι στροβιλομετρικές μέθοδοι περιλαμβάνουν:

• προσδιορισμός πρωτεΐνης με σουλφοσαλικυλικό οξύ (SSC),
• προσδιορισμός πρωτεΐνης με τριχλωροξικό οξύ (THC),
• προσδιορισμού πρωτεΐνης με χλωριούχο βενζεθόνιο.

Οι στροβιλομετρικές μέθοδοι βασίζονται στη μείωση της διαλυτότητας των πρωτεϊνών ούρων λόγω του σχηματισμού ενός εναιωρήματος αιωρούμενων σωματιδίων υπό την επίδραση παραγόντων καταβύθισης. Η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες στο δείγμα δοκιμής κρίνεται είτε με την ένταση της σκέδασης φωτός, προσδιοριζόμενη από τον αριθμό των σωματιδίων διασκορπισμού φωτός (νεφελομετρική μέθοδος ανάλυσης) είτε με εξασθένηση της ροής φωτός από το προκύπτον εναιώρημα (στροβιδομετρική μέθοδος ανάλυσης).

Το μέγεθος της σκέδασης φωτός σε μεθόδους καταβύθισης για την ανίχνευση πρωτεΐνης στα ούρα εξαρτάται από πολλούς παράγοντες: την ταχύτητα ανάμιξης των αντιδραστηρίων, τη θερμοκρασία του μείγματος αντίδρασης, το ρΗ του μέσου, την παρουσία ξένων ενώσεων, τις μεθόδους φωτομετρίας. Η προσεκτική προσκόλληση στις συνθήκες της αντίδρασης συμβάλλει στο σχηματισμό ενός σταθερού εναιωρήματος με ένα σταθερό μέγεθος σωματιδίων και τη λήψη σχετικά επαναλήψιμων αποτελεσμάτων.

Ορισμένα φάρμακα επηρεάζουν τα αποτελέσματα των στροβιλομετρικών μεθόδων για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα, οδηγώντας στα λεγόμενα "ψευδώς θετικά" ή "ψευδώς αρνητικά" αποτελέσματα. Αυτά περιλαμβάνουν ορισμένα αντιβιοτικά (βενζυλοπενικιλλίνη, κλοξακιλλίνη, κτλ.), Ακτινοδιαπερατές ουσίες που περιέχουν ιώδιο, φάρμακα σουλφά.

Οι στροβιλομετρικές μέθοδοι είναι ελάχιστα τυποποιημένες, οδηγώντας συχνά σε εσφαλμένα αποτελέσματα, αλλά παρά ταύτα, χρησιμοποιούνται σήμερα ευρέως σε εργαστήρια λόγω του χαμηλού κόστους και της διαθεσιμότητας των αντιδραστηρίων. Η πιο ευρέως χρησιμοποιούμενη μέθοδος στη Ρωσία είναι ο προσδιορισμός της πρωτεΐνης με σουλφοσαλικυλικό οξύ.

Χρωματομετρικές μέθοδοι

Τα πιο ευαίσθητα και ακριβή είναι οι χρωματομετρικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της ολικής πρωτεΐνης ούρων, με βάση συγκεκριμένες αντιδράσεις χρωστικής πρωτεΐνης.

Αυτά περιλαμβάνουν:

1. αντίδραση διουρίας,
2. Μέθοδος Lowry
3. μέθοδοι που βασίζονται στην ικανότητα των διαφόρων βαφών να σχηματίσουν σύμπλοκα με πρωτεΐνες:
   • Ponceau S (Ponceau S),
   • Coomassie Brilliant Blue Coomassie Λαμπρό μπλε
   • Pyrogallol κόκκινο.

Από την οπτική γωνία του ερμηνευτή, στην καθημερινή εργασία του εργαστηρίου με μεγάλη ροή έρευνας, η μέθοδος διουρίας είναι ακατάλληλη λόγω του μεγάλου αριθμού ενεργειών. Ταυτόχρονα, η μέθοδος χαρακτηρίζεται από υψηλή αναλυτική αξιοπιστία, επιτρέπει τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης σε ευρύ φάσμα συγκεντρώσεων και την ανίχνευση αλβουμίνης, σφαιρινών και παραπρωτεϊνών με συγκρίσιμη ευαισθησία, ως αποτέλεσμα της οποίας η μέθοδος διουρίας θεωρείται ως αναφορά και συνιστάται για σύγκριση άλλων αναλυτικών μεθόδων ανίχνευσης πρωτεΐνης στα ούρα. Η μέθοδος διουρίας για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα εκτελείται κατά προτίμηση σε εργαστήρια που εξυπηρετούν τα τμήματα νεφρολογίας και χρησιμοποιείται σε περιπτώσεις όπου τα αποτελέσματα του προσδιορισμού χρησιμοποιώντας άλλες μεθόδους είναι αμφισβητήσιμα, καθώς και για τον προσδιορισμό της ποσότητας της καθημερινής απώλειας πρωτεϊνών σε νεφρολογικούς ασθενείς.

Lowry μέθοδο που έχει υψηλότερη ευαισθησία σε σύγκριση με την μέθοδο διουρίας συνδυάζει την αντίδραση διουρίας και αντίδραση Folin για τα αμινοξέα τυροσίνη και τρυπτοφάνη στην σύνθεση του πρωτεϊνικού μορίου. Παρά την υψηλή ευαισθησία, αυτή η μέθοδος δεν παρέχει πάντοτε αξιόπιστα αποτελέσματα κατά τον προσδιορισμό της περιεκτικότητας σε πρωτεΐνες στα ούρα. Ο λόγος γι 'αυτό είναι η μη ειδική αλληλεπίδραση του αντιδραστηρίου Folin με μη πρωτεϊνικά συστατικά των ούρων (συνηθέστερα αμινοξέα, ουρικό οξύ, υδατάνθρακες). Ο διαχωρισμός αυτών και άλλων συστατικών ούρων με διάλυση ή κατακρήμνιση πρωτεϊνών επιτρέπει την επιτυχή χρήση αυτής της μεθόδου για τον ποσοτικό προσδιορισμό της πρωτεΐνης ούρων. Μερικά φάρμακα - σαλικυλικά, χλωροπρομαζίνη, τετρακυκλίνες είναι ικανά να επηρεάσουν αυτή τη μέθοδο και να διαστρεβλώσουν τα αποτελέσματα της μελέτης.

Η επαρκής ευαισθησία, η καλή αναπαραγωγιμότητα και η ευκολία προσδιορισμού της πρωτεΐνης με βαφές σύνδεσης καθιστούν αυτές τις μεθόδους πολλά υποσχόμενες, αλλά το υψηλό κόστος των αντιδραστηρίων εμποδίζει την ευρύτερη χρήση τους σε εργαστήρια. Προς το παρόν, η κόκκινη μέθοδος pyrogallol γίνεται όλο και πιο συνηθισμένη στη Ρωσία.

Κατά τη διεξαγωγή μελέτης του επιπέδου πρωτεϊνουρίας, πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι διαφορετικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεϊνουρίας έχουν διαφορετική ευαισθησία και ειδικότητα σε πολλές πρωτεΐνες ούρων.

Με βάση τα εμπειρικά δεδομένα, συνιστάται να προσδιοριστεί η πρωτεΐνη με δύο διαφορετικές μεθόδους και να υπολογιστεί η πραγματική τιμή χρησιμοποιώντας έναν από τους ακόλουθους τύπους:

πρωτεϊνουρία = 0,4799 Β + 0,5230 L.
πρωτεϊνουρία = 1,5484 Β-0,4825 S,
πρωτεϊνουρία = 0.2167 S + 0.7579 L;
πρωτεϊνουρία = 1,0748 Ρ - 0,0986 Β.
πρωτεϊνουρία = 1.0104 Ρ - 0.0289 S;
πρωτεϊνουρία = 0,8959 Ρ + 0,0845 L;

όπου:
B - αποτέλεσμα μέτρησης με Coomassie G-250;
Το L είναι το αποτέλεσμα μέτρησης με το αντιδραστήριο του Lowry.
P - αποτέλεσμα μέτρησης με μολυβδαινικό πυρογαλλόλη.
Το S είναι το αποτέλεσμα μέτρησης με σουλφοσαλικυλικό οξύ.

Λαμβάνοντας υπόψη τις σημειώνονται διακυμάνσεις στο επίπεδο της πρωτεϊνουρίας σε διαφορετικές ώρες της ημέρας, καθώς και την εξάρτηση της συγκέντρωσης πρωτεΐνης στα ούρα από διούρηση, διάφορες του περιεχομένου του σε μεμονωμένα δείγματα ούρων επί του παρόντος στην παθολογία της νεφρικής λαμβάνονται για την αξιολόγηση της σοβαρότητας της πρωτεϊνουρίας σε μία ημερήσια απώλεια πρωτεΐνης στα ούρα, δηλαδή για να προσδιοριστεί η λεγόμενη καθημερινή πρωτεϊνουρία. Εκφράζεται σε g / ημέρα.

Αν είναι αδύνατο να συλλεχθούν καθημερινά ούρα, συνιστάται να προσδιορίζεται η συγκέντρωση πρωτεΐνης και κρεατινίνης σε μία μερίδα ούρων. Εφόσον ο ρυθμός απελευθέρωσης κρεατινίνης κατά τη διάρκεια της ημέρας είναι αρκετά σταθερός και δεν εξαρτάται από τις μεταβολές στον ρυθμό ούρησης, ο λόγος συγκέντρωσης πρωτεΐνης προς συγκέντρωση κρεατινίνης είναι σταθερός. Αυτός ο λόγος συσχετίζεται καλά με την καθημερινή απέκκριση πρωτεΐνης και επομένως μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να εκτιμηθεί η σοβαρότητα της πρωτεϊνουρίας. Η κανονική αναλογία πρωτεΐνης / κρεατινίνης πρέπει να είναι μικρότερη από 0,2. Η πρωτεΐνη και η κρεατινίνη μετριέται σε g / l. Ένα σημαντικό πλεονέκτημα της μεθόδου εκτίμησης της σοβαρότητας της πρωτεϊνουρίας με την αναλογία πρωτεϊνικής κρεατινίνης είναι η πλήρης εξάλειψη των σφαλμάτων που σχετίζονται με την αδυναμία ή την ατελής συλλογή των καθημερινών ούρων.

Λογοτεχνία:

• OV Novoselov, MB Πιατιγκόρσκ, Yu Ε Mikhailov, «Κλινική πτυχές του εντοπισμού και της αξιολόγησης της πρωτεϊνουρίας,» Εγχειρίδιο επικεφαλής CDL, τον αριθμό 1, τον Ιανουάριο 2007
• Α. Β. Κοζλόφ, "Πρωτεϊνουρία: μέθοδοι για την ανίχνευσή της", διάλεξη, Αγία Πετρούπολη, SPbMAPO, 2000
• VL Emanuel, "Εργαστηριακή διάγνωση νεφροπάθειας. Ουροποιητικό Σύνδρομο ", - Εγχειρίδιο του επικεφαλής του KDL, αρ. 12, Δεκέμβριος 2006
• V.I. Pupkova, L.M. Prasolov - Προσδιορισμός της πρωτεΐνης στα ούρα και στο εγκεφαλονωτιαίο υγρό. Koltsovo, 2007
• Εγχειρίδιο κλινικών εργαστηριακών μεθόδων έρευνας. Ed. Ε. Α. Kost. Μόσχα, "Medicine", 1975

Σχετικά άρθρα

Ποσοτικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της ολικής πρωτεΐνης ούρων

Κάθε δείγμα ούρων είναι κατάλληλο για ποσοτικοποίηση πρωτεϊνών. Οι περισσότεροι ερευνητές προτιμούν να προσδιορίσουν την ποσότητα πρωτεΐνης στα ούρα που συλλέγεται ανά ημέρα προκειμένου να εξακριβωθεί η καθημερινή απώλεια πρωτεΐνης.

Τμήμα: Ανάλυση ούρων

Ημι-ποσοτικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της ολικής πρωτεΐνης στα ούρα

Επί του παρόντος, διαγνωστικές ταινίες χρησιμοποιούνται όλο και περισσότερο για τον προσδιορισμό των πρωτεϊνών ούρων. Για τον ημι-ποσοτικό προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα σε μια λωρίδα, η συνηθέστερα χρησιμοποιούμενη χρωστική είναι μπλε βρωμοφαινόλης σε κιτρικό ρυθμιστικό διάλυμα. Η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες στα ούρα κρίνεται από την ένταση του μπλε-πράσινου χρώματος, που αναπτύσσεται μετά την επαφή της ζώνης αντίδρασης με τα ούρα.

Τμήμα: Ανάλυση ούρων

Ποιοτικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της ολικής πρωτεΐνης στα ούρα

Όλα τα υψηλής ποιότητας δείγματα πρωτεϊνών ούρων βασίζονται στην ικανότητα των πρωτεϊνών να μετουσιώνουν υπό την επίδραση διαφόρων φυσικών και χημικών παραγόντων. Παρουσία πρωτεΐνης στο δείγμα ούρων, υπάρχει είτε θολερότητα είτε απώλεια κροκιδώδους ιζήματος.

Τμήμα: Ανάλυση ούρων

Προσδιορισμός της πρωτεΐνης ούρων σε δείγμα με 20% σουλφοσαλικυλικό οξύ

Το δείγμα με 20% σουλφοσαλικυλικό οξύ αναφέρεται στις ποιοτικές αντιδράσεις για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα. Δεδομένου ότι βασίζεται στην αντίδραση πήξης, τα ελεγχόμενα ούρα πρέπει να πληρούν ορισμένες προϋποθέσεις: να είναι διαφανή και να έχουν μια όξινη αντίδραση.

Τμήμα: Ανάλυση ούρων

Δοκιμή δαχτυλιδιού Geller

Η δοκιμή δακτυλίου Geller είναι μια ποιοτική αντίδραση για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης ούρων. Δεδομένου ότι βασίζεται στην αντίδραση πήξης, τα ελεγχόμενα ούρα πρέπει να πληρούν ορισμένες προϋποθέσεις: να είναι διαφανή και να έχουν μια όξινη αντίδραση.

Τμήμα: Ανάλυση ούρων

Μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα

Μια μικρή ποσότητα πρωτεΐνης στα καθημερινά ούρα βρίσκεται επίσης σε εντελώς υγιή άτομα, ωστόσο, τέτοιες μικρές συγκεντρώσεις δεν ανιχνεύονται σε μεμονωμένες μερίδες χρησιμοποιώντας σήμερα χρησιμοποιούμενες μεθόδους. Περίπου το 70% των πρωτεϊνών ούρων ενός υγιούς ατόμου αντιπροσωπεύει ουρομυκίνη, μια πρωτεΐνη που είναι προϊόν του ιστού των νεφρών. Έτσι, η αναλογία της σπειραματικής πρωτεΐνης στα ούρα των υγιή ανθρώπων είναι αμελητέα και η πρωτεϊνουρία είναι φυσιολογικά 50-150 mg / ημέρα, με τις περισσότερες πρωτεΐνες ούρων ταυτόσημες με τον ορό γάλακτος.

Είναι αποδεκτό να γίνεται διάκριση μεταξύ των ακόλουθων μορφών πρωτεϊνουρίας ανάλογα με τον τόπο προέλευσης: πρενέλη, που σχετίζεται με αυξημένη διάσπαση πρωτεϊνών ιστών, σοβαρή αιμόλυση, νεφρική, λόγω της παθολογίας των νεφρών, η οποία μπορεί να χωριστεί σε σπειραματική και σωληνωτή? postrenal, που σχετίζεται με την παθολογία της ουροφόρου οδού και συχνότερα προκαλείται από φλεγμονώδη έκκριση.

Ανάλογα με τη διάρκεια της ύπαρξης των απομονωμένων σταθερή πρωτεϊνουρίας, υπάρχουν για πολλές εβδομάδες, ακόμη και χρόνια, και παροδική, εμφανίζεται περιοδικά, μερικές φορές ακόμη και εν απουσία της νεφρικής νόσου, όπως πυρετό και σοβαρή δηλητηρίαση. Είναι σκόπιμο να γίνει διάκριση μεταβλητότητα πρωτεϊνουρία: την ημερησία απώλεια πρωτεΐνης έως περίπου 1 g - μέτρια, από 1 έως 3 g - και κατά μέσο όρο πάνω από 3 g - εκφράζεται.

Η ανίχνευση στα ούρα πρωτεϊνών με σχετικά μεγάλο μοριακό βάρος δεικνύει την απουσία εκλεκτικότητας του νεφρικού φίλτρου και την έντονη βλάβη του. Σε αυτές τις περιπτώσεις, μιλάμε για τη χαμηλή επιλεκτικότητα της πρωτεϊνουρίας. Επομένως, επί του παρόντος, ο ορισμός των κλασμάτων πρωτεϊνών ούρων έχει γίνει ευρέως διαδεδομένος. Οι πιο ακριβείς μέθοδοι είναι η ηλεκτροφόρηση σε πηκτώματα αμύλου και πολυακρυλαμιδίου.
Σύμφωνα με τα αποτελέσματα που προκύπτουν από αυτές τις μεθόδους, μπορεί κανείς να κρίνει την επιλεκτικότητα της πρωτεϊνουρίας.

Οι περισσότερες ποιοτικές και ποσοτικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα βασίζονται στην πήξη του στον όγκο των ούρων ή στη διεπιφάνεια μεταξύ των μέσων (ούρα και οξύ). εάν υπάρχει ένας τρόπος μέτρησης της έντασης της πήξης, τότε το δείγμα γίνεται ποσοτικό.

Ενοποιημένη δοκιμασία σουλφοσαλικυλικού οξέος:

Απαιτούμενο αντιδραστήριο:

20% διάλυμα σουλφοσαλικυλικού οξέος.

Η πορεία της μελέτης:

Σε 2 δοκιμαστικούς σωλήνες ρίχνουμε 3 ml διηθημένων ούρων. Στο δοκιμαστικό σωλήνα προσθέστε 6-8 σταγόνες αντιδραστηρίου. Σε σκούρο φόντο συγκρίνετε τον σωλήνα ελέγχου με έναν έμπειρο. Η θολότητα στον δοκιμαστικό σωλήνα δείχνει την παρουσία πρωτεΐνης, το δείγμα θεωρείται θετικό.

Εάν η αντίδραση των ούρων είναι αλκαλική, τότε πριν από την εξέταση οξινίζεται με 2-3 σταγόνες υδατικού διαλύματος οξικού οξέος 10%.

Brandberg-Roberts-Stolnikov ενοποιημένη μέθοδος:

Η μέθοδος βασίζεται στην Geller δείγματος δακτυλίου, που αποτελείται από το ότι στα σύνορα του νιτρικού οξέος και της παρουσίας των ούρων σε πρωτεΐνες της πήξης λαμβάνει χώρα και φαίνεται άσπρο δαχτυλίδι.

Απαιτούμενο αντιδραστήριο:

30% διάλυμα νιτρικού οξέος (σχετική πυκνότητα 1,2) ή αντιδραστήριο Larionic.
Παρασκευή του αντιδραστηρίου Larion: 20-30 g χλωριούχου νατρίου διαλύονται με θέρμανση σε 100 ml αποσταγμένου νερού, αφήνονται να ψυχθούν, διηθούνται. Σε 99 ml του διηθήματος χύνεται 1 ml πυκνού νιτρικού οξέος.

Η πορεία της μελέτης:

1-2 ml νιτρικού οξέος (ή αντιδραστήριο Larionic acid) χύνεται μέσα στο σωλήνα και προσεκτικά, πάνω από το τοίχωμα του σωλήνα, τοποθετείται η ίδια ποσότητα φιλτραρισμένου ούρων. Η εμφάνιση λεπτού λευκού δακτυλίου στη διεπιφάνεια δύο υγρών μεταξύ του 2ου και του 3ου λεπτού δείχνει την παρουσία πρωτεΐνης σε συγκέντρωση περίπου 0,033 g / l. Αν ο δακτύλιος εμφανιστεί νωρίτερα από 2 λεπτά μετά την επίστρωση, τα ούρα πρέπει να αραιωθούν με νερό και να επαναδιαμορφωθούν τα ήδη αραιωμένα ούρα. Ο βαθμός αραίωσης των ούρων επιλέγεται ανάλογα με τον τύπο του δακτυλίου, δηλ. το πλάτος, τη συμπαγή του και το χρόνο εμφάνισής του. Με δακτυλιοειδές δακτύλιο, που εμφανίστηκε νωρίτερα 2 λεπτά, τα ούρα αραιώνονται 2 φορές, με ένα ευρύ - 4 φορές, με συμπαγές ένα - 8 φορές, κλπ. Η συγκέντρωση πρωτεΐνης υπολογίζεται με πολλαπλασιασμό 0,033 με το ρυθμό αραίωσης και εκφράζεται σε γραμμάρια ανά 1 λίτρο (g / l).

Μερικές φορές λαμβάνεται ένας λευκός δακτύλιος όταν υπάρχουν μεγάλες ποσότητες ουρικών. Σε αντίθεση με τον δακτύλιο πρωτεΐνης, ο ουρικός είναι ελαφρώς υψηλότερος από το όριο μεταξύ δύο υγρών και διαλύεται όταν ελαφρώς θερμαίνεται.

Ποσοτικός προσδιορισμός της πρωτεΐνης στα ούρα με θολερότητα, που σχηματίζεται με την προσθήκη σουλφοσαλικυλικού οξέος:

Η αρχή της μεθόδου:

Η ένταση θολερότητας κατά την πήξη πρωτεΐνης με σουλφοσαλικυλικό οξύ είναι ανάλογη της συγκέντρωσής της.

Απαιτούμενα αντιδραστήρια:

1. 3% διάλυμα σουλφοσαλικυλικού οξέος.

2. 0,9% διάλυμα χλωριούχου νατρίου.

3. Τυπικό διάλυμα αλβουμίνης - διάλυμα 1% (1 ml διαλύματος που περιέχει 10 mg αλβουμίνης): 1 g λυοφιλοποιημένης αλβουμίνης (από ανθρώπινο ή βόειο ορό) διαλύεται σε μικρή ποσότητα διαλύματος χλωριούχου νατρίου 0,9% σε φιάλη χωρητικότητας 100 ml και έπειτα προσαρμόζεται στο σημάδι με την ίδια λύση. Το αντιδραστήριο σταθεροποιείται με προσθήκη 1 ml διαλύματος 5% αζιδίου του νατρίου (NaN3). Όταν φυλάσσεται στο ψυγείο, το αντιδραστήριο ισχύει για 2 μήνες.

Ειδικός εξοπλισμός - φωτοηλεκτρικό χρωματόμετρο.

Η πορεία της μελέτης:

1,25 ml διηθημένων ούρων εισάγεται σε δοκιμαστικό σωλήνα, συμπληρώνεται μέχρι 5 ml με διάλυμα 3% σουλφοσαλικυλικού οξέος και αναμειγνύεται. Μετά από 5 λεπτά, μετριούνται σε ένα φωτοηλεκτρικό χρωματόμετρο σε μήκος κύματος 590-650 nm (φίλτρο πορτοκαλί ή κόκκινου φωτός) έναντι μάρτυρα σε κύτταρο με μήκος οπτικής διαδρομής 5 mm. Ο έλεγχος είναι ένας σωλήνας στον οποίο προστέθηκαν 1,25 ml διηθημένων ούρων μέχρι 5 ml διαλύματος χλωριούχου νατρίου 0,9%. Ο υπολογισμός πραγματοποιείται σύμφωνα με το πρόγραμμα βαθμονόμησης, για την κατασκευή των οποίων παρασκευάζονται διαλύματα από το πρότυπο διάλυμα, όπως υποδεικνύεται στον πίνακα.

Από κάθε προκύπτον διάλυμα, λαμβάνονται 1.25 ml και υποβάλλονται σε επεξεργασία ως πειραματικά δείγματα.

Η ευθύγραμμη εξάρτηση κατά την κατασκευή ενός γραφήματος βαθμονόμησης αποθηκεύεται μέχρι 1 g / l. Σε υψηλότερες συγκεντρώσεις, το δείγμα πρέπει να αραιωθεί και να ληφθεί υπόψη η αραίωση στον υπολογισμό.

Ψευδώς θετικά αποτελέσματα μπορούν να ληφθούν αν υπάρχουν παράγοντες αντίθεσης στα ούρα που περιέχουν οργανικό ιώδιο. Ως εκ τούτου, η δοκιμή δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε άτομα που λαμβάνουν παρασκευάσματα ιωδίου. ένα ψευδώς θετικό αποτέλεσμα μπορεί επίσης να οφείλεται σε παρασκευάσματα σουλφανιλαμίδης, σε μεγάλες δόσεις πενικιλλίνης και σε υψηλές συγκεντρώσεις στα ούρα ουρικού οξέος.

Μέθοδος Biuret:

Η αρχή της μεθόδου:

Οι πεπτιδικοί δεσμοί της πρωτεΐνης με άλατα χαλκού σε αλκαλική C σχηματίζουν ένα σύμπλεγμα πορφυρού χρώματος. Οι πρωτεΐνες προ-ιζηματοποιούνται με τριχλωροοξικό οξύ.

Απαιτούμενα αντιδραστήρια:

1. διάλυμα τριχλωροοξικού οξέος 10%.
2. 20% διάλυμα χαλκού (CuSO4 · 5H2O).
3. 3% διάλυμα ΝαΟΗ.

Η πορεία της μελέτης:

Σε 5 ml ούρων που λαμβάνονται από την ημερήσια ποσότητα, προσθέστε 3 ml διαλύματος τριχλωροοξικού οξέος, φυγοκεντρήθηκε σε σταθερό όγκο ιζήματος. Το υπερκείμενο απορροφάται με πιπέτα, το ίζημα στη συνέχεια διαλύεται σε 5 ml διαλύματος ΝθΟΗ. Στο διάλυμα προστίθενται 0,25 ml CuS04, το μίγμα αναδεύεται και φυγοκεντρείται. Το υπερκείμενο φωτομετρείται σε μήκος κύματος 540 nm σε κυψελίδα με μήκος οπτικής διαδρομής 10 mm έναντι αποσταγμένου νερού. Η συγκέντρωση της πρωτεΐνης υπολογίζεται από την καμπύλη βαθμονόμησης, ενώ κατά την απεικόνισή της σχεδιάζεται η συγκέντρωση της πρωτεΐνης (g / l) στον άξονα y και η οπτική πυκνότητα στις μονάδες εξαφάνισης στον άξονα της τετμημένης. Με βάση τη συγκέντρωση που λαμβάνεται, υπολογίζεται η ημερήσια απώλεια πρωτεΐνης στα ούρα.

Χρήση χαρτιού ένδειξης (λωρίδες):

Η πρωτεΐνη μπορεί να ανιχνευθεί χρησιμοποιώντας χαρτί δείκτη (λωρίδες), το οποίο παράγεται από τους "Albuphan", "Ames" (Αγγλία), "Albustix", "Boehringer" (Γερμανία), "Comburtest" κ.λπ.

Η αρχή βασίζεται στο φαινόμενο του αποκαλούμενου σφάλματος πρωτεϊνών ορισμένων δεικτών οξέος βάσης. Το τμήμα δείκτη του χαρτιού είναι κορεσμένο με μπλε τετραβρωμοφαινόλης και κιτρικό ρυθμιστικό διάλυμα. Όταν το χαρτί υγραίνεται, το ρυθμιστικό διάλυμα διαλύεται και παρέχει το κατάλληλο ρΗ για την αντίδραση δείκτη.

Σε 3,0-3,5 αμινομάδες πρωτεϊνών αντιδρούν με τον δείκτη και αλλάζουν το αρχικό κίτρινο χρώμα του σε ένα καταπράσινο μπλε, μετά από το οποίο, σε σύγκριση με την κλίμακα χρώματος, είναι δυνατόν να εκτιμηθεί κατά προσέγγιση η συγκέντρωση πρωτεΐνης στα ούρα. Η βασική προϋπόθεση για τη σωστή λειτουργία των λωρίδων ένδειξης είναι η παροχή ρΗ στην περιοχή 3,0-3,5 για να συμβεί η αντίδραση.

Εάν το χαρτί έρχεται σε επαφή με τα ούρα υπό μελέτη μεγαλύτερο από την έκθεση που καθορίζεται στις οδηγίες, το διάλυμα κιτρικού διαλύεται σε αυτό και κατόπιν ο δείκτης αντιδρά με το πραγματικό ρΗ των ούρων, δηλ. δίνει μια λανθασμένη θετική αντίδραση. Λόγω του γεγονότος ότι η χωρητικότητα του ρυθμιστικού διαλύματος είναι περιορισμένη, ακόμη και αν ακολουθηθούν οι οδηγίες σε δείγματα πολύ αλκαλικών ούρων (pH> 6,5), λαμβάνονται ψευδώς θετικά αποτελέσματα και σε δείγματα πολύ όξινων ούρων (pH 6,5), με χαμηλή σχετική πυκνότητα ούρα και σε χαμηλή συγκέντρωση πρωτεΐνης Bens jones.

Απαιτούμενα αντιδραστήρια:

2 Μ οξικό ρυθμιστικό διάλυμα ρΗ 4,9.

Η πορεία της μελέτης:

Τα διηθημένα ούρα σε ποσότητα 4 ml αναμιγνύονται με 1 ml ρυθμιστικού διαλύματος και θερμαίνονται για 15 λεπτά σε υδατόλουτρο σε θερμοκρασία 56 ° C. Παρουσία πρωτεϊνών Bens-Jones εμφανίζεται έντονο ίζημα μέσα σε 2 λεπτά και αν η συγκέντρωση πρωτεΐνης Bens-Jones είναι μικρότερη από 3 g / l, το δείγμα μπορεί να είναι αρνητικό. Στην πράξη, αυτό είναι εξαιρετικά σπάνιο, αφού στο μεγαλύτερο μέρος της η συγκέντρωση της πρωτεΐνης Bens-Jones στα ούρα είναι σημαντική.

Με απόλυτη βεβαιότητα, η πρωτεΐνη Bens-Jones μπορεί να ανιχνευθεί με μια ανοσοηλεκτροφορητική μελέτη χρησιμοποιώντας ειδικούς ορούς κατά των βαριών και ελαφρών αλυσίδων των ανοσοσφαιρινών.

Προσδιορισμός της άλμψωσης (πρωτεόση):

Τα λευκώματα είναι προϊόντα διάσπασης πρωτεϊνών, η αρχή της οποίας βασίζεται στο γεγονός ότι δεν διπλώνουν όταν βρασμένα, αλλά δίνουν μια θετική διουρία αντίδραση και αλατίζονται με μερικά άλατα, ειδικά θειικό αμμώνιο και οξικό ψευδάργυρο σε όξινο περιβάλλον.

Τα φυσιολογικά ούρα δεν περιέχουν άλμμωση. Τα ίχνη μπορεί να είναι σε φυσιολογικά ούρα σε περίπτωση προσμείξεων σπέρματος. Στην παθολογία, η άλμπελος μπορεί να εμφανιστεί στα ούρα κατά τη διάρκεια των εμπύρετων καταστάσεων, τις μεταγγίσεις αίματος και πλάσματος, την απορρόφηση των εκκριμάτων και των διαβητικών και την αποσύνθεση των όγκων.

Απαιτούμενα αντιδραστήρια:

1. Κορεσμένο διάλυμα χλωριούχου νατρίου.
2. Συμπυκνωμένο διάλυμα καυστικής σόδας.
3. Αδύνατο διάλυμα θειικού χαλκού (σχεδόν άχρωμο).

Η πορεία της μελέτης:

Ένα κορεσμένο διάλυμα χλωριούχου νατρίου (όγκος 1/3) προστίθεται στα ούρα οξινισμένο με οξικό οξύ, βράζεται και το καυτό υγρό διηθείται. Οι λευκώματα περνούν στο διήθημα, όπου η παρουσία τους προσδιορίζεται από μια διουρία αντίδραση. Στο διήθημα προστίθεται 1/2 όγκου συμπυκνωμένου διαλύματος καυστικής σόδας και μερικές σταγόνες ασθενούς διαλύματος θειικού χαλκού. Με ένα θετικό δείγμα, λαμβάνεται ένα κόκκινο-ιώδες χρώμα.

Με θετικό τεστ με σουλφοσαλικυλικό οξύ, τα ούρα θερμαίνονται. Εάν η θολότητα εξαφανιστεί και επανεμφανιστεί όταν ψύχεται, αυτό σημαίνει ότι τα ούρα περιέχουν λευκώματα ή το πρωτεϊνικό σώμα του Bens-Jones.

Πρωτεΐνη στα ούρα, εργαστηριακές εξετάσεις

Μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης των ούρων

Για την κλινική έχει σημασία τόσο ο ποιοτικός όσο και ο ποσοτικός προσδιορισμός της πρωτεΐνης στα ούρα.

Ποιοτικές δοκιμές για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης ούρων
Προτάθηκαν περισσότερες από 100 αντιδράσεις για τον ποιοτικό προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα. Τα περισσότερα από αυτά βασίζονται στην κατακρήμνιση πρωτεϊνών με φυσική (θέρμανση) ή χημικά μέσα. Η παρουσία πρωτεΐνης αποδεικνύεται από την εμφάνιση θολότητας.

Επίσης ενδιαφέρον παρουσιάζουν τα χρωματομετρικά ξηρά δείγματα.

Παρακάτω θα περιγραφούν μόνο τα πιο σημαντικά για την πρακτική του δείγματος.

Δοκιμασία σουλφοσαλικυλικού οξέος. Σε λίγα χιλιοστόλιτρα ούρων προσθέστε 2-4 σταγόνες διαλύματος 20% σουλφοσαλικυλικού οξέος. Όταν εμφανίζεται θετική αντίδραση θολότητα. Το αποτέλεσμα υποδηλώνεται από τους όρους: opalescence, μια ασθενώς θετική, θετική ή έντονα θετική αντίδραση. Η δοκιμασία σουλφοσαλικυλικού οξέος είναι ένα από τα πιο ευαίσθητα δείγματα για την καθιέρωση της πρωτεΐνης στα ούρα. Βρίσκει ακόμη και τις μικρότερες μη φυσιολογικές αυξήσεις της πρωτεΐνης των ούρων. Χάρη σε μια απλή τεχνική, αυτή η δοκιμή έχει βρει ευρεία εφαρμογή.

Δοκιμάστε με ασετόλη. Η ασεπτόλη είναι υποκατάστατο του σουλφοσαλικυλικού οξέος. Μπορεί να παρασκευαστεί από υλικά διαθέσιμα σε οποιοδήποτε εργαστήριο (φαινόλη και θειικό οξύ). Ως αντιδραστήριο, χρησιμοποιείται ένα διάλυμα 20% ασβετόλης. Η δοκιμή διεξάγεται ως εξής: σε δοκιμαστικό σωλήνα που περιέχει 2-3 ml ούρων, προστίθενται 0,5-1-1 ml διαλύματος ασβετόλης στον πυθμένα. Εάν ένας λευκός δακτύλιος πήξης πρωτεΐνης αποδειχθεί στο όριο μεταξύ δύο υγρών, το δείγμα είναι θετικό.

Δοκιμή του Geller. Κάτω από μερικά χιλιοστόλιτρα ούρων, αλατίζονται 1-2 ml 30% νιτρικού οξέος (ειδικό βάρος 1.20). Εάν παράγεται λευκός δακτύλιος στη διεπιφάνεια και των δύο υγρών, το δείγμα είναι θετικό. Η αντίδραση γίνεται θετική εάν η πρωτεΐνη είναι μεγαλύτερη από 3,3 mg%. Μερικές φορές λαμβάνεται ένας λευκός δακτύλιος όταν υπάρχουν μεγάλες ποσότητες ουρικών. Σε αντίθεση με τον δακτύλιο πρωτεΐνης, ο ουραϊκός δακτύλιος δεν εμφανίζεται στο όριο μεταξύ των δύο υγρών, αλλά ελαφρώς υψηλότερος. Η Larionova προτείνει να χρησιμοποιηθεί αντί του 30% νιτρικού οξέος ως αντιδραστήριο 1% διάλυμα νιτρικού οξέος σε κεκορεσμένο διάλυμα χλωριούχου νατρίου, Αυτό προσφέρει μεγάλη εξοικονόμηση σε νιτρικό οξύ.

Δείγμα με κάλιο και οξικό οξύ zhelezystosinerodisty. Αυτή η αντίδραση καθιστά δυνατή την απομόνωση πρωτεϊνών ορού από νουκλεοαλβουμίνη.

Ίσες ποσότητες ούρων χύνεται σε δύο σωλήνες. Σε ένα από αυτά προσθέστε μερικές σταγόνες διαλύματος οξικού οξέος 30%. Εάν επιτευχθεί θολότητα σε σύγκριση με το σωλήνα ελέγχου, τα ούρα περιέχουν νουκλεοαλβουμίνη. Αν δεν εμφανιστεί θολότητα, τα περιεχόμενα των δύο σωλήνων αναμιγνύονται και πάλι χωρίζονται σε δύο μέρη. Σε έναν από τους δύο δοκιμαστικούς σωλήνες, προσθέστε μερικές σταγόνες (μια περίσσεια μπορεί να μετατρέψει ένα θετικό δείγμα σε αρνητικό) ενός διαλύματος 10% του κιτρίνου αίματος (σιρόπι σιδηροκυανιούχου καλίου). Με την παρουσία πρωτεϊνών ορού γάλακτος, αποκτάται θολότητα.

Με συγκεντρωμένα ούρα που περιέχουν μεγάλες ποσότητες ουρικού οξέος και ουρικού, πρέπει να γίνει δείγμα με κάλιο και σιρόπι κάλιο και οξικό οξύ μετά από προκαταρκτική αραίωση (2-3 φορές) ούρων με νερό. Διαφορετικά, μπορεί να εμφανιστεί θολερότητα που προκαλείται από ιζηματοποιημένο ουρικό οξύ.

Αυτό είναι ιδιαίτερα σημαντικό στη μελέτη ούρων σε βρέφη, τα οποία περιέχουν πολύ ουρικό οξύ και ουρικά.

Από τα υπόλοιπα ποιοτικά δείγματα για πρωτεΐνη στα ούρα, με βάση την κατακρήμνιση πρωτεϊνών, έχουν βρεθεί εφαρμογή: δοκιμή βρασμού, Esbach, Perdi, Roberts, Almen, Balloni, Buro, Claudius, Corso, Dome, Goodmann-Suzanne, Jolla, Exton, Kamlet, Kobuladze, Liliendal-Petersen, Polacci, Pons, Spiegler, Tanre, Thiele, Brown, Tsushia, κλπ.

Στην παραγωγή υψηλής ποιότητας δείγματα πρωτεΐνης στα ούρα, με βάση την εναπόθεση πρωτεϊνών, είναι απαραίτητο να τηρηθούν οι ακόλουθοι γενικοί κανόνες, η παραβίαση των οποίων οδηγεί σε σημαντικά λάθη στη μελέτη.

1. Τα ούρα που πρόκειται να υποβληθούν σε δοκιμή πρέπει να είναι όξινα. Με αλκαλική αντίδραση, τα ούρα οξεοποιούνται ελαφρά με οξικό οξύ. Η παραγωγή δείγματος με αλκαλικά ούρα σε περιπτώσεις όπου ένα οξύ χρησιμοποιείται ως αντιδραστήριο μπορεί να οδηγήσει σε εξουδετέρωση του οξέος και σε αρνητικό αποτέλεσμα με θετική αντίδραση. Αυτό ισχύει ιδιαίτερα για τη δοκιμασία σουλφοσαλικυλικού οξέος, καθώς το οξύ προστίθεται σε πολύ μικρές ποσότητες και μπορεί εύκολα να εξουδετερωθεί.

2. Τα διερευνηθέντα ούρα πρέπει να είναι διαφανή.

3. Τα δείγματα για την καθιέρωση της πρωτεΐνης στα ούρα θα πρέπει πάντα να γίνονται σε δύο σωλήνες, εκ των οποίων το ένα χρησιμεύει ως έλεγχος. Χωρίς σωλήνα ελέγχου, δεν μπορεί να παρατηρηθεί θολότητα φωτός κατά τη διάρκεια των αντιδράσεων.

4. Η ποσότητα του προστιθέμενου οξέος στα δείγματα δεν πρέπει να είναι πολύ μεγάλη. Μια μεγάλη ποσότητα οξέος μπορεί να οδηγήσει στον σχηματισμό διαλυτής όξινης αλβουμίνης και στον μετασχηματισμό θετικού δείγματος σε αρνητικό.

Λόγω της απλής τεχνικής τους, τα χρωματομετρικά ξηρά δείγματα αξίζουν πολλή προσοχή. Όταν χρησιμοποιούνται αυτά τα δείγματα, η επίδραση που έχει η πρωτεΐνη στο χρώμα του δείκτη στο ρυθμιστικό διάλυμα (αποκαλούμενοι δείκτες σφάλματος πρωτεϊνών). Ένα χαρτί διηθήσεως εγχυμένο με ρυθμιστικό διάλυμα κιτρικού οξέος και μπλε βρωμοφαινόλης ως δείκτης απορροφάται στα ούρα για μικρό χρονικό διάστημα. Το δείγμα είναι θετικό εάν μετατραπεί σε μπλε-πράσινο χρώμα. Συγκρίνοντας την ένταση του χρωματισμού με τα πρότυπα του έγχρωμου χαρτιού, είναι δυνατόν να αντληθούν σχετικά και ποσοτικά συμπεράσματα. Το χαρτί δεικτών πωλείται σε πακέτα με τα αντίστοιχα πρότυπα χρώματος, όπως το χαρτί γενικής ένδειξης.

Μέθοδοι ποσοτικού προσδιορισμού της πρωτεΐνης ούρων
Έχουν προταθεί πολλές μέθοδοι για τον ποσοτικό προσδιορισμό της πρωτεΐνης ούρων. Οι ακριβείς ποσοτικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό πρωτεϊνών σε βιολογικό υλικό δεν χρησιμοποιούνται ευρέως στον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα, λόγω πολύπλοκων και χρονοβόρων τεχνικών. Οι ογκομετρικές μέθοδοι είναι ευρέως διαδεδομένες, ιδιαίτερα η μέθοδος Esbach. Είναι πολύ απλά, αλλά, δυστυχώς, δεν είναι πολύ ακριβή. Οι μέθοδοι του ομίλου Brandberg-Stolnikov, οι οποίες δίνουν ακριβέστερα αποτελέσματα από τις ογκομετρικές μεθόδους, με μια σχετικά απλή τεχνική, είναι επίσης κατάλληλες για την κλινική. Με την παρουσία φωτόμετρου ή νεφελομέτρου, είναι επίσης κατάλληλες και νεφελομετρικές μέθοδοι.

Μέθοδος Esbach. Προτάθηκε από τον παρισινό ιατρό Esbach το 1874. Ρίξτε τα ούρα και το αντιδραστήριο σε ένα ειδικό δοκιμαστικό σωλήνα (albuminometer της Esbach). Ο σωλήνας σφραγίζεται με ελαστικό πώμα, αναδεύεται καλά (χωρίς κτύπημα!) Και αφήνεται σε όρθια θέση μέχρι την επόμενη μέρα. Αναφέρετε τη διαίρεση, η οποία φθάνει στη στήλη του πρωτεϊνικού ιζήματος. Ο αριθμός που βρέθηκε δείχνει την περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες. Είναι πολύ σημαντικό με τη μέθοδο Esbach ότι τα ούρα είναι όξινα. Τα αλκαλικά ούρα μπορούν να εξουδετερώσουν τα όξινα συστατικά του αντιδραστηρίου και να αποτρέψουν την κατακρήμνιση πρωτεϊνών.

Πλεονεκτήματα της μεθόδου: είναι απλή και βολική στην πράξη.

Μειονεκτήματα: Η μέθοδος είναι ανακριβής, το αποτέλεσμα επιτυγχάνεται μετά από 24-48 ώρες.

Μέθοδος Brandberg-Stolnikov. Βασίζεται στη δοκιμή ποιότητας της Geller. Το δείγμα Geller μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τον ποσοτικό προσδιορισμό, δεδομένου ότι δίνει θετικό αποτέλεσμα με περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες άνω των 3,3 mg%. Αυτή είναι η τελική συγκέντρωση πρωτεΐνης κάτω από την οποία το δείγμα γίνεται αρνητικό.

Τροποποίηση του Ehrlich και του Althausen. Οι σοβιετικοί επιστήμονες S. L. Ehrlich και A. Ya. Altgauzen τροποποίησαν τη μέθοδο Brandberg-Stolnikov, υποδεικνύοντας τις δυνατότητες απλούστευσης της έρευνας και εξοικονόμησης χρόνου στην παραγωγή της.

Η πρώτη απλούστευση σχετίζεται με τον χρόνο εμφάνισης του δακτυλίου. Καθορίζεται ακριβώς ο χρόνος της εμφάνισής του, χωρίς απαραίτητα να τηρείται στο 2ο και 3ο λεπτό.

Η δεύτερη απλούστευση επιτρέπει να διαπιστωθεί τι είδους αναπαραγωγή πρέπει να γίνει. Οι συγγραφείς έχουν αποδείξει ότι η απαιτούμενη αραίωση μπορεί να καθοριστεί κατά προσέγγιση από τον τύπο δακτυλίου που λαμβάνεται. Διακρίνουν νηματοειδή, ευρεία
και συμπαγή δακτύλιο.

Από τις νεφελομετρικές μεθόδους αξίζει να σημειωθεί η μέθοδος Kingsberry και Clark. 2,5 ml διηθημένων ούρων χύνεται εντός ενός μικρού διαβαθμισμένου κυλίνδρου, συμπληρώνονται με 3% υδατικό διάλυμα σουλφοσαλικυλικού οξέος έως 10 ml. Ανακατέψτε καλά και, μετά από 5 λεπτά, φωτομετεστερίστε σε κυψελίδα 1 cm, με κίτρινο φίλτρο, χρησιμοποιώντας νερό ως υγρό αντιστάθμισης. Με το φωτομετρικό Pulfrich, η εξαφάνιση που βρέθηκε, πολλαπλασιασμένη επί 2,5, δίνει την ποσότητα πρωτεΐνης σε% o. Στην περίπτωση που ο δείκτης απόσβεσης είναι υψηλότερος του 1,0, τα ούρα αραιώνονται εκ των προτέρων 2 φορές, 4 φορές ή και περισσότερο.

Προκειμένου να υπάρχει μια σαφής ιδέα για την ποσότητα των πρωτεϊνών που απεκκρίνονται στα ούρα, είναι απαραίτητο να καθοριστεί όχι μόνο η συγκέντρωσή τους σε ξεχωριστό τμήμα των ούρων, αλλά και η συνολική ημερήσια ποσότητα τους. Για να γίνει αυτό, συλλέξτε τα ούρα του ασθενούς για 24 ώρες, μετρήστε τον όγκο του σε χιλιοστόλιτρα και προσδιορίστε τη συγκέντρωση πρωτεΐνης σε μια μερίδα ημερησίων ούρων σε g%. Η ποσότητα των πρωτεϊνών που απεκκρίνονται στα ούρα σε 24 ώρες προσδιορίζεται ανάλογα με την ημερήσια ποσότητα ούρων σε γραμμάρια.

Η κλινική σημασία της πρωτεΐνης στα ούρα

Τα ανθρώπινα ούρα περιέχουν συνήθως ελάχιστες ποσότητες πρωτεΐνης που δεν μπορούν να αποδειχθούν με συνήθη ποιοτικά δείγματα δοκιμής πρωτεϊνών ούρων. Η απέκκριση μεγάλων ποσοτήτων πρωτεϊνών, στις οποίες τα συνηθισμένα δείγματα υψηλής ποιότητας για πρωτεΐνη στα ούρα γίνονται θετικά - ένα μη φυσιολογικό φαινόμενο, που ονομάζεται πρωτεϊνουρία. Η πρωτεϊνουρία είναι φυσιολογική μόνο στο νεογέννητο, στις πρώτες 4-10 ημέρες μετά τη γέννηση. Η ονομασία αλβουμινουρία, που χρησιμοποιείται συνήθως, είναι λανθασμένη, επειδή όχι μόνο η αλβουμίνη, αλλά και άλλοι τύποι πρωτεϊνών (σφαιρίνες, κλπ.) Εκκρίνονται στα ούρα.

Η πρωτεϊνουρία, ως διαγνωστικό σύμπτωμα, ανακαλύφθηκε το 1770 από τον Cotuno.

Η πιο σημαντική λειτουργική νεφρική πρωτεϊνουρία στα παιδιά είναι η εξής:

1. Φυσιολογική πρωτεϊνουρία του νεογέννητου. Εμφανίζεται στα περισσότερα νεογέννητα και δεν έχει δυσμενή σημασία. Εξηγείται από ένα ανώριμο νεφρικό φίλτρο, τη βλάβη κατά τη γέννηση ή την απώλεια υγρών στις πρώτες ημέρες της ζωής. Η φυσιολογική πρωτεϊνουρία εξαφανίζεται την 4-10η ημέρα μετά τη γέννηση (στα πρόωρα βρέφη αργότερα). Η ποσότητα της πρωτεΐνης είναι μικρή. Είναι νουκλεοαλβουμίνη.

Η νεογνική αλβουμινουρία, η οποία διαρκεί πολύ καιρό, μπορεί να είναι ένα σύμπτωμα συγγενών διαταραχών.

2. Αλβουμινουρία του εγκεφαλικού. Αυτές προκαλούνται από την υπέρβαση του ορίου φυσιολογική ευερεθιστότητα νεφρική φίλτρο σημαντική μηχανική, θερμική, χημική, ψυχική και άλλα ερεθίσματα - απώλεια υγρών σε βρέφη (Αφυδάτωση πρωτεϊνουρία), κρύο κολύμβησης, άφθονη, υψηλής περιεκτικότητας σε πρωτεΐνες των τροφίμων (πεπτικό πρωτεϊνουρία), νεφρού ψηλάφηση (ψηλάφηση λευκωματουρία) σωματική υπερβολική εργασία, φόβο, κλπ.

Η εγκεφαλική αλβουμινουρία εμφανίζεται πιο εύκολα στα παιδιά σε νεαρή ηλικία από ότι σε παιδιά μεγαλύτερης ηλικίας και σε ενήλικες, καθώς τα νεφρά ενός βρέφους και ενός μικρού παιδιού είναι ευκολότερα ερεθισμένα. Η αφυδάτωση αλβουμινουρία (διαταραχές στη διατροφή, υδρολυτότητα, τοξίκωση, διάρροια, έμετος) είναι ιδιαίτερα συχνή στα βρέφη.

Η αλβουμινουρία του εγκεφαλικού είναι καλοήθης. Εξαφανίζονται αμέσως μετά την εξάλειψη των αιτιών τους. Περιστασιακά λευκοκύτταρα, κύλινδροι και ερυθρά αιμοσφαίρια βρίσκονται μερικές φορές στο ίζημα. Η πρωτεΐνη είναι συνήθως νουκλεοαλβουμίνη.

3. Ορθοστατική πρωτεϊνουρία. Αυτή η κατάσταση είναι χαρακτηριστική για παιδιά προσχολικής και σχολικής ηλικίας. Εμφανίζεται με βάση αγγειοκινητικές διαταραχές στην παροχή αίματος στους νεφρούς. Χαρακτηριστική για την ορθοστατική αλβουμινουρία (εξ ου και το όνομά της) είναι ότι εμφανίζεται μόνο όταν το παιδί στέκεται, όταν η σπονδυλική στήλη βρίσκεται σε λαοδωτική θέση. Στη θέση ύπτια, εξαφανίζεται. Η νουκλεοαλβουμίνη απελευθερώνεται. Σε δύσκολες περιπτώσεις, μπορείτε να καταφύγετε σε ορθοστατική εμπειρία, η οποία συνίσταται στα εξής: το βράδυ, μια ώρα πριν ξαπλωθεί, το παιδί αδειάζει την ουροδόχο κύστη. το πρωί, να πάρει από το κρεβάτι, απελευθερώνει πάλι ούρα. Αυτά τα ούρα δεν περιέχουν πρωτεΐνες. Στη συνέχεια, το παιδί βάζει στα γόνατά του για 15-30 λεπτά με ένα ραβδί πίσω από την πλάτη του, ανάμεσα στους αγκώνες και των δύο χεριών λυγισμένο. Δημιουργεί μια θέση λόρδωσης, η οποία οδηγεί στην απελευθέρωση πρωτεΐνης, χωρίς αλλαγές στα ιζήματα.

Με την ορθοστατική αλβουμινουρία, 8-10 g πρωτεΐνης μπορούν να απελευθερωθούν ανά ημέρα.

Η οργανική νεφρική πρωτεϊνουρία έχει μεγάλη κλινική σημασία μεταξύ όλων της πρωτεϊνουρίας. Προκαλούνται από οργανικές νεφρικές παθήσεις (νεφρίτιδα, νεφρώς, νεφροσκλήρυνση). Η πρωτεϊνουρία είναι ένα από τα σημαντικότερα και πιο γνωστά συμπτώματα της οργανικής νεφροπάθειας.

1. Σε οξεία και χρόνια σπειραματονεφρίτιδα, η πρωτεϊνουρία εμφανίζεται τακτικά. Η ποσότητα της πρωτεΐνης είναι μέτρια και δεν υπάρχει παράλληλος μεταξύ του βαθμού πρωτεϊνουρίας και της σοβαρότητας της νόσου. Αντίθετα, χρόνια και σοβαρότερη νεφρίτη συμβαίνουν συχνά με μικρότερες ποσότητες πρωτεΐνης από ό, τι οξείες. Μετά από οξεία νεφρίτιδα, μερικές φορές για μεγάλο χρονικό διάστημα (χρόνια), δημιουργούνται μικρές ποσότητες πρωτεΐνης στα ούρα, χωρίς παθολογική σημασία («υπολειμματική λευκωματουρία»). Δεν πρέπει να λησμονούμε ότι μπορεί επίσης να συμβεί και η «νεφρίτιδα χωρίς πρωτεϊνουρία». Μερικές φορές η πρωτεΐνη βρίσκεται σε μία μερίδα ούρων και σε άλλη δεν είναι. Η αναλογία της λευκωματίνης προς τις σφαιρίνες στην οξεία νεφρίτιδα είναι χαμηλή και στη χρόνια νεφρίτιδα είναι υψηλότερη.

2. Σε περίπτωση νεφροσκλήρωσης, η ποσότητα των πρωτεϊνών στα ούρα είναι ασήμαντη, οι μορφές της ασθένειας χωρίς πρωτεΐνη στα ούρα απαντώνται συχνά.

3. Από όλες τις νεφρικές παθήσεις, η νεφρική εμφάνιση εμφανίζεται με την πιο έντονη πρωτεϊνουρία.

4. Σε περίπτωση μολυσματικών και τοξικών συνθηκών, εντοπίζεται η λεγόμενη εμπύρετη και τοξική πρωτεϊνουρία. Πρόκειται για οξεία νεφρóτητα, στην οποία η ποσότητα της πρωτεΐνης είναι μικρή. Σε αυτή την ομάδα ανήκουν, και πρωτεϊνουρία σε σπασμωδικές καταστάσεις (σπασμούς), με υπερθυρεοειδισμό, ίκτερο, εγκολεασμού εντεροκολίτιδα, εγκαύματα, σοβαρή αναιμία, και ούτω καθεξής.. Αυτά είναι καλοήθεις και λευκωματουρία περάσει γρήγορα (παροδική λευκωματουρία).

5. Όταν αίμα σταματά στα νεφρά, εμφανίζεται η αποκαλούμενη συμφορητική λευκωματινουρία, η οποία είναι χαρακτηριστική των καρδιαγγειακών ασθενών στο στάδιο της αποζημίωσης. Βρίσκεται επίσης σε ασκίτες και όγκους της κοιλίας.

Σε εμπύρετη, τοξική και συμφορητική λευκωματινουρία, η αυξημένη διαπερατότητα του νεφρικού φίλτρου είναι ιδιαίτερα έντονη. Σύμφωνα με ορισμένους συγγραφείς, πολλοί σε αυτή την πρωτεϊνουρία εμφανίζονται χωρίς οργανική βλάβη στο νεφρικό παρέγχυμα.

Η εξωρενική αλβουμινουρία προκαλείται συνήθως από ακαθαρσίες πρωτεϊνών (εκκρίσεις, σπασμένα κύτταρα) που εκκρίνονται από το νοσογόνο ουροποιητικό σύστημα και τα όργανα του φύλου. Συχνά βρήκε εξανθρακική αλβουμινουρία λόγω της κυστεροειδίτιδας (πυουρία), λιγότερο συχνά λόγω της αιδοιοκολπίτιδας, του λογισμικού και των όγκων της ουροφόρου οδού.

Όταν η εξωρενική αλβουμινουρία στο ίζημα βρίσκει μεγάλο αριθμό λευκοκυττάρων και βακτηριδίων. Νεφρικά στοιχεία σχεδόν ποτέ δεν εμφανίζονται. Η ποσότητα της πρωτεΐνης είναι μικρή. Τα φιλτραρισμένα ή φυγοκεντρημένα ούρα συνήθως δεν δίνουν θετικό δείγμα πρωτεϊνών.

Σε ανθρώπους που αναρρώνουν από πυελίτιδα, η λευκωματουρία εξαφανίζεται μετά από βακτηριουρία και πυουρία.

Πρέπει να τονιστεί ως χαρακτηριστικό φαινόμενο ότι στις πρώιμες παιδικές ηλικίες οι οργανικές νεφρικές ασθένειες είναι εξαιρετικά σπάνιες, επομένως, η οργανική πρωτεϊνουρία είναι επίσης σπάνια. Από αυτούς βρίσκονται, κυρίως, εμπύρετοι και τοξικοί. Σε αντίθεση με την οργανική πρωτεϊνουρία, η αλβουμινουρία είναι πολύ συχνή στα μικρά παιδιά.

Στα μεγαλύτερα παιδιά, η οργανική πρωτεϊνουρία είναι πιο συχνά λειτουργική. Γενικά, με την ηλικία, η λειτουργική πρωτεϊνουρία είναι λιγότερο συχνή και οργανική συχνότερα.

Ηλεκτροφορητικές μελέτες πρωτεϊνών στα ούρα

Ένας αριθμός συγγραφέων χρησιμοποιεί την ηλεκτροφορητική μέθοδο για τη μελέτη των πρωτεϊνών στα ούρα (ουροπρωτεΐνες). Από το ληφθέν ηλεκτροφόριο είναι σαφές ότι έχουν την ίδια ποιοτική σύνθεση με τις πρωτεΐνες του πλάσματος. Αυτό δείχνει ότι οι πρωτεΐνες στα ούρα προέρχονται από πρωτεΐνες πλάσματος.

Ποιοτικός και ποσοτικός προσδιορισμός της πρωτεΐνης στα ούρα.

Κανονικές τιμές: Η κανονική πρωτεΐνη στα ούρα περιέχεται σε ελάχιστες ποσότητες που δεν ανιχνεύονται από τις συνηθισμένες ποιοτικές αντιδράσεις. Το ανώτερο όριο του προτύπου της πρωτεΐνης στα ούρα είναι 0,033 g / l. Εάν η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες είναι υψηλότερη από αυτή την τιμή, τότε τα δείγματα πρωτεϊνών υψηλής ποιότητας είναι θετικά.

Η κλινική σημασία του ορισμού:

Η εμφάνιση πρωτεΐνης στα ούρα ονομάζεται πρωτεϊνουρία. Η πρωτεϊνουρία μπορεί να είναι ψευδής και νεφρική. Η εξωρενική πρωτεϊνουρία μπορεί να είναι παρουσία προσμείξεων πρωτεϊνικής προέλευσης από τα γεννητικά όργανα (κολπίτιδα, ουρηθρίτιδα, κλπ.), Ενώ η ποσότητα πρωτεΐνης είναι ασήμαντη - μέχρι 0,01 g / l. Η νεφρική πρωτεϊνουρία μπορεί να είναι λειτουργική (με υποθερμία, σωματική άσκηση, πυρετό) και οργανική - με σπειραματονεφρίτιδα, πυελονεφρίτιδα, νεφρίτιδα, νεφρωσία, νεφρική ανεπάρκεια. Στη νεφρική πρωτεϊνουρία, η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες μπορεί να είναι από 0,033 έως 10-15 g / l, μερικές φορές υψηλότερη.

Η αρχή της μεθόδου: βασίζεται στο γεγονός ότι η πρωτεΐνη υπό τη δράση των ανόργανων οξέων πήζει (γίνεται ορατή). Ο βαθμός θολότητας εξαρτάται από την ποσότητα πρωτεΐνης.

Ανίχνευση πρωτεΐνης στα ούρα με 20% σουλφοσαλικυλικό οξύ.

Αντιδραστήρια: 20% διάλυμα σουλφοσαλικυλικού οξέος. Εξοπλισμός: σκούρο φόντο.

1. Απαιτήσεις για τα ούρα: τα ούρα πρέπει να είναι όξινα (ή ελαφρώς όξινα) pH, πρέπει να είναι διαφανή, για το σκοπό αυτό, τα ούρα φυγοκεντρίζονται. Τα αλκαλικά ούρα οξινίζονται σε ένα ασθενώς όξινο μέσο αντίδρασης, χρησιμοποιώντας χαρτί δείκτη για έλεγχο.

2. Σε 2 δοκιμαστικούς σωλήνες της ίδιας διαμέτρου ρίξτε 2 ml προπαρασκευασμένων ούρων. 1 δοκιμαστικό σωλήνα - έλεγχος, 2 - εμπειρία. Στο δοκιμαστικό σωλήνα προσθέστε 4 σταγόνες 20% σουλφοσαλικυλικού οξέος.

3. Το αποτέλεσμα σημειώνεται σε σκούρο φόντο.

4. Παρουσία πρωτεΐνης, τα ούρα στο δοκιμαστικό σωλήνα αυξάνουν θολά.

Ποιοτικός προσδιορισμός πρωτεΐνης στα ούρα με δοκιμαστικές ταινίες.

Για την ταυτοποίηση της πρωτεϊνουρίας χρησιμοποιούνται διάφορες ταινίες μονοστείας: Albufan, Albustiks, Biofan Ε και πολιτικές δοκιμασίες: Triscan, Nonafan και άλλοι.

Ανίχνευση πρωτεΐνης στα ούρα με τη μέθοδο του Roberts - Stolnikov.

Η αρχή της μεθόδου: βασίζεται στο γεγονός ότι η πρωτεΐνη υπό τη δράση των ανόργανων οξέων πήζει (γίνεται ορατή). Ο βαθμός θολότητας εξαρτάται από την ποσότητα πρωτεΐνης (δηλ. Τη δοκιμή δακτυλίου Geller). Όταν η συγκέντρωση πρωτεΐνης στα ούρα είναι 0,033 g / l, μέχρι το τέλος των 3 λεπτών μετά την επίστρωση των ούρων εμφανίζεται ένα λεπτό λευκό νήμα.

Αντιδραστήρια: 50% διάλυμα νιτρικού οξέος ή αντιδραστηρίου Roberts (98 μέρη κεκορεσμένου διαλύματος χλωριούχου νατρίου και 2 μέρη πυκνού υδροχλωρικού οξέος) ή αντιδραστηρίου Larionic (98 μέρη κεκορεσμένου διαλύματος χλωριούχου νατρίου και 2 μέρη πυκνού νιτρικού οξέος).

Εξοπλισμός: σκούρο φόντο.

1. Απαιτήσεις για τα ούρα: τα ούρα πρέπει να είναι όξινα (ή ελαφρώς όξινα) pH, πρέπει να είναι διαφανή, για το σκοπό αυτό, τα ούρα φυγοκεντρίζονται. Τα αλκαλικά ούρα οξινίζονται σε ένα ασθενώς όξινο μέσο αντίδρασης, χρησιμοποιώντας χαρτί δείκτη για έλεγχο.

2. Προσθέστε 2 ml διαλύματος νιτρικού οξέος 50% ή ενός από τα αντιδραστήρια σε δοκιμαστικό σωλήνα και στη συνέχεια ρίξτε προσεκτικά τον ίδιο όγκο παρασκευασμένων ούρων κατά μήκος του τοιχώματος του σωλήνα με μια πιπέτα.

3. Το δείγμα παραμένει για 3 λεπτά

4. Μετά από 3 λεπτά, αναφέρετε το αποτέλεσμα. Το αποτέλεσμα σημειώνεται σε σκούρο φόντο στο μεταδιδόμενο φως. Εάν ο δακτύλιος είναι πλατύς, συμπαγής, τότε τα ούρα αραιώνονται με αποσταγμένο νερό και τοποθετούνται ξανά στο αντιδραστήριο.

5. Τα ούρα αραιώνονται έως ότου μετά από 3 λεπτά σχηματιστεί ένας λεπτός νηματώδης δακτύλιος.

6. Ο υπολογισμός της περιεκτικότητας σε πρωτεΐνες στα ούρα παράγεται σύμφωνα με τον τύπο:

C = 0,033 g / l χ βαθμό αραίωσης.

194.48.155.245 © studopedia.ru δεν είναι ο συντάκτης των υλικών που δημοσιεύονται. Παρέχει όμως τη δυνατότητα δωρεάν χρήσης. Υπάρχει παραβίαση πνευματικών δικαιωμάτων; Γράψτε μας | Ανατροφοδότηση.

Απενεργοποιήστε το adBlock!
και ανανεώστε τη σελίδα (F5)
πολύ αναγκαία

Μεθοδολογική ανάπτυξη των πρακτικών τάξεων "Προσδιορισμός της πρωτεΐνης στα ούρα" (1 σειρά μαθημάτων)

Κέντρο Εκπαίδευσης Κεφαλαίων
Μόσχα

Θέμα: Προσδιορισμός πρωτεΐνης ούρων.

Στόχος: Η μελέτη της μελέτης των χημικών ιδιοτήτων των ούρων.

Να μελετήσουν τις ποσοτικές και ποιοτικές μεθόδους για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης ούρων.

Μάθετε τις βασικές αρχές εργασίας με δοκιμαστικές ταινίες σε αυτόματους αναλυτές.

Είδος απασχόλησης: πρακτική (6 ώρες)

Ο φοιτητής πρέπει να γνωρίζει:

Ποιοτικά δείγματα για προσδιορισμό πρωτεϊνών.

Roberts - Stolnikov.

Προσδιορισμός της πρωτεΐνης 3% SSC.

Μέθοδος Biuret προσδιορισμού πρωτεϊνών (THU).

Η διαγνωστική αξία των δεικτών έρευνας.

Ο φοιτητής πρέπει να είναι σε θέση να:

Προετοιμασία ενός χώρου εργασίας για τη διενέργεια δοκιμών ούρων.

Προετοιμάστε τα αντιδραστήρια, τα πιάτα και τον εξοπλισμό για τη μελέτη.

Για τον προσδιορισμό των χημικών ιδιοτήτων των ούρων (πρωτεΐνη στα ούρα με ποιοτικές και ποσοτικές μεθόδους).

Εργασία με κενά προϊόντα (σχεδιασμός των εντύπων ανάλυσης).

Τη σωστή ερμηνεία των αποτελεσμάτων της μελέτης.

Μέσα για την επίτευξη του στόχου:

1. Εργασία με σημειώσεις, εκπαιδευτική και ειδική βιβλιογραφία.

2. Προετοιμασία για πρακτικές ασκήσεις με τη χρήση των μεθοδολογικών συστάσεων του εκπαιδευτικού, την υλοποίηση και την εκτέλεση της πρακτικής εργασίας.

3. Εργασία με ενημερωτικά μέσα εκπαίδευσης σε ηλεκτρονικά και χάρτινα μέσα.

Εξοπλισμός για χώρους γραφείου και γραφείου:

θέσεις ανά αριθμό σπουδαστών ·

το χώρο εργασίας του εκπαιδευτικού.

εξειδικευμένα έπιπλα και εξοπλισμό.

Τεχνικά εργαλεία κατάρτισης:

υπολογιστές για να εξοπλίσουν το χώρο εργασίας του δασκάλου και των σπουδαστών.

τεχνικές συσκευές οπτικοακουστικής εμφάνισης πληροφοριών ·

οπτικοακουστικά διδακτικά βοηθήματα (παρουσίαση, βίντεο κατάρτισης).

Το αποτέλεσμα της μάθησης είναι:

Δημιουργία πρακτικών επαγγελματικών δεξιοτήτων και αρχική πρακτική εμπειρία, συμπεριλαμβανομένων των επαγγελματικών (PC) και γενικών (QA) ικανοτήτων:

PC 1.1. Προετοιμάστε έναν εργασιακό χώρο για εργαστηριακές κλινικές δοκιμές.

PC 1.2. Διεξαγωγή εργαστηριακών κλινικών μελετών βιολογικών υλικών.

PC 1.3. Καταγράψτε τα αποτελέσματα της έρευνας.

PC 1.4. Απορρίψτε το χρησιμοποιημένο υλικό, απολυμάνετε και αποστειρώνετε χρησιμοποιημένα εργαστηριακά γυάλινα σκεύη, εργαλεία και προστατευτικό εξοπλισμό.

OK 1. Κατανόηση της φύσης και της κοινωνικής σημασίας του μελλοντικού επαγγέλματός τους, δείχνουν σταθερό ενδιαφέρον γι 'αυτό.

OK 2. Οργανώστε τις δικές σας δραστηριότητες, επιλέξτε τυποποιημένες μεθόδους και τρόπους για την εκτέλεση επαγγελματικών εργασιών, αξιολογήστε την αποτελεσματικότητα και την ποιότητά τους.

Εντάξει 6. Εργαστείτε σε μια ομάδα και μια ομάδα, επικοινωνείτε αποτελεσματικά με τους συναδέλφους, τη διοίκηση, τους ασθενείς.

OK 9. Να καθοδηγείται στις συνθήκες της αλλαγής της τεχνολογίας στην επαγγελματική δραστηριότητα.

ΟΚ 13. Οργάνωση χώρου εργασίας σύμφωνα με τις απαιτήσεις της προστασίας της εργασίας, της βιομηχανικής υγιεινής, της λοιμώδους και της πυρασφάλειας.

I module. Το θεωρητικό μέρος με τα στοιχεία της ανεξάρτητης εργασίας

Αριθμός εργασίας 1. Μελετήστε και περιγράψτε υλικό μελέτης σε βιβλία εργασίας.

Ένα υγιές άτομο συνήθως περιέχει λιγότερο από 0,002 g / l και σπάνια μέχρι 0,012 g / l πρωτεΐνης και συνήθως αυτή η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες ούρων ονομάζεται "με τη μορφή ιχνών" και δεν ανιχνεύεται με συμβατικές χημικές μεθόδους σε υγιή ανθρώπινα ούρα.

Η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες σε τμήματα ούρων που συλλέγονται σε διαφορετικές ώρες της ημέρας μπορεί να ποικίλει σημαντικά.

Η πρωτεΐνη στα ούρα ονομάζεται πρωτεϊνουρία.

Ανάλογα με την καθημερινή απώλεια πρωτεΐνης, διακρίνονται οι ακόλουθοι βαθμοί πρωτεϊνουρίας: μετριοπαθής - μέχρι 1 g. μέσο - από 1 έως 3 g. προφέρεται - περισσότερο από 3 γραμμάρια.

Υπάρχουν δύο κύριοι τύποι πρωτεϊνουρίας:

Πρωτεϊνουρία, που προκαλείται από ασθένειες του ουροποιητικού συστήματος.

πρωτεϊνουρία, με αλλοιώσεις (ασθένειες) των νεφρών.

Πρωτεϊνουρία που σχετίζεται με φλεγμονώδεις διεργασίες της ουροφόρου οδού, συνοδευόμενη από την εμφάνιση στα ούρα σημαντικού αριθμού λευκοκυττάρων ή ερυθροκυττάρων, η οποία όμως δεν εξαλείφει την ταυτόχρονη διείσδυση πρωτεΐνης στα ούρα από το νεφρικό παρέγχυμα. η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες σπανίως υπερβαίνει το 1 g / l.

Η νεφρική πρωτεϊνουρία στις περισσότερες περιπτώσεις συνδέεται με την αυξημένη διαπερατότητα των σπειραμάτων και διαιρείται σε 2 ομάδες:

Στη φυσιολογική πρωτεϊνουρία περιλαμβάνονται περιπτώσεις προσωρινής εμφάνισης πρωτεΐνης στα ούρα που δεν σχετίζονται με νόσους:

μετά την κατανάλωση μιας μεγάλης ποσότητας τροφής πλούσιας σε μη μετουσιωμένες πρωτεΐνες (ωμό κρέας, ωμά αυγά).

με εντατική μυϊκή εργασία (μεγάλες πεζοπορίες, αθλητικές εκδηλώσεις).

όταν παίρνετε ένα κρύο λουτρό ή ντους?

με ισχυρές συναισθηματικές εμπειρίες.

με επιληπτικές κρίσεις.

Διακρίνετε ορθοστατική ή νεανική πρωτεϊνουρία που εμφανίζεται σε παιδιά και εφήβους και περνάει με την ηλικία. Στη διαφορική διαγνωστική σχέση, είναι πρακτικά σημαντικό ότι η ορθοστατική αλβουμινουρία συχνά απαντάται στην περίοδο ανάκτησης από την οξεία σπειραματονεφρίτιδα.

Η παθολογική νεφρική πρωτεϊνουρία μπορεί να είναι το αποτέλεσμα οργανικών ασθενειών των νεφρών και άλλων οργάνων και συστημάτων: οξεία σπειραματονεφρίτιδα, χρόνια σπειραματονεφρίτιδα. οξεία πυελονεφρίτιδα. χρόνια πυελονεφρίτιδα. νεφροπάθεια των εγκύων γυναικών · διάφορες ασθένειες που συνδέονται με τον πυρετό. σοβαρή χρόνια καρδιακή ανεπάρκεια. και ήπια νεφρική νόσο. νεφρωσική λιποειδής? νεφρική φυματίωση; αιμορραγικοί πυρετοί. αιμορραγική αγγειίτιδα. σοβαρή αναιμία. υπέρταση, κλπ.

Αριθμός εργασίας 2. Επαναγράψτε και σχεδιάστε τα διαγράμματα των εργαστηριακών μεθόδων για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα.

Εργαστηριακές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα

Υπάρχουν ποιοτικές και ποσοτικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα, βασίζονται στην πήξη της πρωτεΐνης στον όγκο των ούρων ή στα όρια των μέσων (ούρα και οξύ). ενώ η μέτρηση του βαθμού πήξης καθιστά το δείγμα ποσοτικό.

δείγμα με 20% σουλφοσαλικυλικό οξύ (τυποποιημένο).

Δοκιμή δακτυλίου Geller (προς το παρόν δεν χρησιμοποιείται).

ανίχνευση πρωτεϊνών χρησιμοποιώντας χαρτί δείκτη (λωρίδες) και ταινίες δοκιμής.

η ενοποιημένη μέθοδος Brandberg-Roberts-Stolnikov.

με 3% σουλφοσαλικυλικό οξύ.

Ποιοτικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα

Αριθμός εργασίας 3. Προσδιορισμός πρωτεΐνης στα ούρα χρησιμοποιώντας τυποποιημένο δείγμα με 20% σουλφοσαλικυλικό οξύ

Η αρχή της μεθόδου: με βάση την πήξη της πρωτεΐνης στον όγκο των ούρων ή στη διεπιφάνεια (ούρα και οξύ)

Πιάτα, εξοπλισμός και αντιδραστήρια:

20% σουλφοσαλικυλικό οξύ (2-υδροξυ-5-σουλφοβενζοϊκό οξύ C ₇ H ₅ 0 ₆ S).

3ml φιλτραρισμένα ούρα

2 κομμάτια χημικούς δοκιμαστικούς σωλήνες

Τρεις σωλήνες από φιλτραρισμένα ούρα εισάγονται σε δύο σωλήνες, προστίθενται 6-8 σταγόνες σουλφοσαλικυλικού οξέος σε μία από αυτές (έμπειρους). Σε σκοτεινό υπόβαθρο και οι δύο σωλήνες συγκρίνονται.

Ερμηνεία των αποτελεσμάτων:

Η αδιαφάνεια στο δοκιμαστικό σωλήνα δείχνει την παρουσία πρωτεΐνης στα ούρα - το δείγμα είναι θετικό.

Σημείωση Τα αλκαλικά ούρα οξινίζονται πριν από τη δοκιμή προσθέτοντας μερικές σταγόνες διαλύματος οξικού οξέος 10%.

Αριθμός εργασίας 4. Προσδιορισμός της πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας τη δοκιμή δακτυλίου Geller

Η αρχή της μεθόδου: Το δείγμα του δακτυλίου βασίζεται στο γεγονός ότι όταν προστίθεται νιτρικό οξύ στα ούρα στη διεπιφάνεια (οξύ - ούρα) παρουσία πρωτεΐνης, πηκτοποιείται και εμφανίζεται ένας λευκός δακτύλιος.

Πιάτα, εξοπλισμός και αντιδραστήρια:

- αντιδραστήρια: διάλυμα 30% νιτρικού οξέος (HNO 3) (d = 1,2) ή λαρυονικό αντιδραστήριο: 20-30 g χλωριούχου νατρίου (NaCl) διαλυμένο σε 100 ml απεσταγμένου νερού όταν θερμαίνεται, ψύχεται, διηθείται. 1 ml πυκνού ΗΝ03 προστίθεται σε 99 ml του διηθήματος.

Στον σωλήνα ρίχνουμε 1 - 2 ml διαλύματος 30% HNO 3 ή αντιδραστηρίου Larionova και στρώστε απαλά την ίδια ποσότητα διηθημένων ούρων στον τοίχο.

Ερμηνεία των αποτελεσμάτων:

Η εμφάνιση στα σύνορα δύο υγρών μεταξύ του δευτέρου και του τρίτου λεπτού ενός λεπτού λευκού δακτυλίου υποδεικνύει την παρουσία πρωτεΐνης στα ούρα.

Σχεδιάστε ένα σχήμα για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης

Ποσοτικοποίηση πρωτεϊνών

Η αρχή της μεθόδου: Το δείγμα δακτυλίου Geller βασίζεται στο γεγονός ότι όταν προστίθεται νιτρικό οξύ στα ούρα στη διεπιφάνεια (οξύ - ούρα) παρουσία πρωτεΐνης, πήζει και εμφανίζεται ένας λευκός δακτύλιος.

Πιάτα, εξοπλισμός και αντιδραστήρια:

Βιολογικό υγρό (ούρα).

Στον σωλήνα ρίχνουμε 1 - 2 ml διαλύματος 30% HNO 3 ή αντιδραστηρίου Larionova και στρώστε απαλά την ίδια ποσότητα διηθημένων ούρων στον τοίχο.

Ερμηνεία των αποτελεσμάτων:

Η εμφάνιση στα σύνορα δύο υγρών μεταξύ του 2ου και 3ου λεπτού
ένας λεπτός λευκός δακτύλιος δείχνει την παρουσία πρωτεΐνης σε συγκέντρωση περίπου 0,033 g / l. Εάν ένας δακτύλιος εμφανιστεί νωρίτερα από 2 λεπτά μετά την ελασματοποίηση, τα ούρα πρέπει να αραιωθούν με αποσταγμένο νερό και να επαναληφθούν με αραιωμένα ούρα. Ο βαθμός αραίωσης των ούρων επιλέγεται ανάλογα με τον τύπο του δακτυλίου, το πλάτος, τη συμπαγή του και τον χρόνο εμφάνισής του.

Με δακτυλιοειδές δακτύλιο, που εμφανίστηκε νωρίτερα 2 λεπτά, τα ούρα αραιώνονται 2 φορές, με ένα ευρύ - 4 φορές, με συμπαγές ένα - 8 φορές, κλπ. Η συγκέντρωση πρωτεΐνης υπολογίζεται πολλαπλασιάζοντας την αραίωση κατά 0,033 g / l.

Μπορεί να σχηματιστεί λευκός δακτύλιος όταν υπάρχει μεγάλος αριθμός ουρατών. αντίθετα με την πρωτεΐνη, εμφανίζεται ελαφρώς πάνω από το όριο δύο υγρών και διαλύεται όταν ελαφρώς θερμαίνεται.

Αριθμός εργασίας 6. Προσδιορισμός της ποσότητας πρωτεΐνης στα ούρα με 3% σουλφοσαλικυλικό οξύ

Η αρχή της μεθόδου: Η συγκέντρωση της πρωτεΐνης στα ούρα είναι ανάλογη της θολερότητας που εμφανίζεται όταν πήζει το σουλφοσαλικυλικό οξύ

Πιάτα, εξοπλισμός και αντιδραστήρια:

0,9% διάλυμα χλωριούχου νατρίου.

1% πρότυπο διάλυμα λευκωματίνης - 1 g λυοφιλοποιημένης αλβουμίνης (από ανθρώπινο ή βόειο ορό) διαλύεται σε μικρή ποσότητα διαλύματος NaCl 0,9% σε φιάλη χωρητικότητας 100 ml και κατόπιν συμπληρώνεται μέχρι το σημείο με τον ίδιο διαλύτη. Το αντιδραστήριο σταθεροποιείται με προσθήκη 1 ml διαλύματος 5% αζιδίου του νατρίου (NaN3). Όταν φυλάσσεται στο ψυγείο, το αντιδραστήριο είναι σταθερό για 2 μήνες.

1,25 ml διηθημένων ούρων εισάγονται σε δοκιμαστικό σωλήνα, προστίθενται 3,75 ml διαλύματος 3% σουλφοσαλικυλικού οξέος και αναμιγνύονται. Μετά από 5 λεπτά, το δείγμα φωτομετρείται σε PEC σε μήκος κύματος 590-650 nm (φίλτρο πορτοκαλί ή κόκκινου φωτός) έναντι του μάρτυρα σε κυψελίδα με μήκος οπτικής διαδρομής 5 mm. Ο έλεγχος χρησιμεύει ως ένα δείγμα στο οποίο προστίθενται 3,75 ml διαλύματος χλωριούχου νατρίου 0,9% σε 1,25 ml ούρων. Η συγκέντρωση πρωτεΐνης υπολογίζεται σύμφωνα με ένα γράφημα βαθμονόμησης, για την κατασκευή του οποίου παρασκευάζονται αραιώσεις ενός πρότυπου διαλύματος λευκωματίνης. (βλ. πίνακα). Από κάθε ληφθέν αραιωμένο διάλυμα, λαμβάνονται 1.25 ml και υποβάλλονται σε επεξεργασία ως πειραματικά δείγματα.

Παρασκευή αραιώσεων για τη γραφική παράσταση της βαθμονόμησης

Πρότυπο διάλυμα, ml

0,9% διάλυμα χλωριούχου νατρίου, ml

Συγκέντρωση πρωτεϊνών, g / l

Η ευθύγραμμη εξάρτηση του μεγέθους της εξαφάνισης και της συγκέντρωσης πρωτεΐνης διατηρείται μέχρι 1 g / l. Σε υψηλότερες συγκεντρώσεις πρωτεϊνών, το δείγμα πρέπει να αραιωθεί και να ληφθεί υπόψη η αραίωση στον υπολογισμό.

Εάν υπάρχουν ουσία που περιέχει ιώδιο στα ούρα, μπορούν να ληφθούν ψευδώς θετικά αποτελέσματα. Ως εκ τούτου, η δοκιμή δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε ασθενείς που λαμβάνουν ιωδιούχα παρασκευάσματα ή που έχουν υποβληθεί σε έρευνα χρησιμοποιώντας ακτινοπροστατευτικές ενώσεις που περιέχουν ιώδιο. Οι ψευδώς θετικές αντιδράσεις J κατά τη διάρκεια της μελέτης μπορούν να προκληθούν με λήψη φαρμάκων σουλφανιλαμίδης, μεγάλων δόσεων πενικιλλίνης και σε υψηλές συγκεντρώσεις στα ούρα ουρικού οξέος.

Σχεδιάστε ένα σχήμα για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης

Αριθμός εργασίας 7. Ανίχνευση Bens-Jones στα ούρα

Η αρχή της μεθόδου: με βάση τη θερμοπυρηξηση αντίδρασης

Πιάτα, εξοπλισμός και αντιδραστήρια:

Αντιδραστήριο: 2Μ οξικό ρυθμιστικό διάλυμα ρΗ 4,9.

4 ml διηθημένων ούρων αναμιγνύονται με 1 ml ρυθμιστικού διαλύματος και θερμαίνονται για 15 λεπτά σε υδατόλουτρο στους 56 ° C.

Ερμηνεία των αποτελεσμάτων:

Παρουσία πρωτεΐνης Bens-Jones στα ούρα, εμφανίζεται ένα έντονο ίζημα στα πρώτα 2 λεπτά.

Όταν η συγκέντρωση πρωτεΐνης είναι μικρότερη από 3 g / l, το δείγμα μπορεί να είναι αρνητικό, το οποίο είναι αρκετά σπάνιο, αφού συνήθως η συγκέντρωση της πρωτεΐνης Bens-Jones στα ούρα είναι πολύ σημαντική.

Η πιο αξιόπιστη ανίχνευση της πρωτεΐνης Bens-Jones είναι με καθίζηση σε θερμοκρασία 40-60 ° C. Εντούτοις, σε πολύ όξινα (pH μικρότερα από 3,0) ή πολύ αλκαλικά (pH μεγαλύτερο από 6,5) ούρα, με χαμηλή σχετική πυκνότητα ούρων και χαμηλή συγκέντρωση Bens-Jones μπεζ (κάτω από 3 g / l), δεν μπορεί να συμβεί καθίζηση.

Σχεδιάστε ένα σχήμα για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης

II. Ανεξάρτητη εργασία με το στάδιο της έρευνας

Αριθμός εργασίας 1. Μελετήστε και περιγράψτε την εφαρμογή №1 "Ανίχνευση πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας διαγνωστικές δοκιμαστικές ταινίες"

- Λάβετε δείγματα βιολογικού υγρού (ούρων) από τον δάσκαλο, απαριθμήστε τα δείγματα.

- Διεξάγετε δοκιμασία ούρων χρησιμοποιώντας διαγνωστικές ταινίες δοκιμής.

- Αξιολογήστε το αποτέλεσμα (κανόνας, παθολογία). Υποθέστε την αιτία της πρωτεΐνης στα ούρα.

- Γράψτε το αποτέλεσμα στις φόρμες ανάλυσης, παραδώστε το στον δάσκαλο.

"Ανίχνευση πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας διαγνωστικές ταινίες δοκιμής"

Αρχή Η πρωτεΐνη αλλάζει το χρώμα του δείκτη που εφαρμόζεται στην ταινία. Οι δείκτες συσκευάζονται σε μια σειρά από 100 λωρίδες, οι οποίες αποθηκεύονται σε μια καλά κλειστή θήκη μολυβιού, σε ένα δροσερό και ξηρό μέρος.

Κανόνες εργασίας με διαγνωστικές ταινίες μέτρησης

Όταν εργάζεστε με διαγνωστικές ταινίες δοκιμής, πρέπει να τηρείτε τους ακόλουθους κανόνες:

- να φυλάσσονται διαγνωστικές ταινίες δοκιμής σε καλά κλεισμένες συσκευασίες δοχείων.

- για την αποθήκευση των περιπτώσεων σε σκοτεινό, ξηρό, δροσερό μέρος σε θερμοκρασία που δεν υπερβαίνει τους 30 ° C, αλλά όχι στο ψυγείο.

- Μην εκθέτετε τις ταινίες σε υγρασία και άμεσο ηλιακό φως, υψηλή θερμοκρασία και πτητικές χημικές ουσίες.

- λάβετε μόνο τον αυστηρά απαραίτητο αριθμό ταινιών και, στη συνέχεια, κλείστε αμέσως την υπόθεση.

- Μην αγγίζετε τις ζώνες διάγνωσης με τα δάχτυλά σας.

Κανόνες δοκιμής

1. Για τη μελέτη, χρησιμοποιήστε πρωινά ούρα που συλλέγονται σε ένα δοχείο απορριμμάτων ούρων (ή καθαρά ξηρά πιάτα). Ανακατέψτε τα παραδοθέντα ούρα, αλλά μην φυγοκεντρίζετε.

Όταν χρησιμοποιείτε μη τυποποιημένες συσκευασίες, τα υπολείμματα απορρυπαντικού στο δοχείο συλλογής ούρων προκαλούν ψευδή αποτελέσματα.

2. Από τη θήκη μολυβιού, πάρτε μια ταινία μέτρησης.

3. Αμέσως κλείστε την θήκη με το καπάκι του εργοστασίου, προστατέψτε την ταινία από την υγρασία.

4. Χαμηλώστε τις ταινίες χαρτιού ένδειξης για 2-3 δευτερόλεπτα μέσα στα εξεταζόμενα ούρα και αφαιρέστε τα αμέσως.

5. Για να απομακρύνετε την υπερβολική υγρασία από τις ζώνες διάγνωσης της λωρίδας, εκτελέστε την με μακρύ άκρο κατά μήκος της άκρης του δοχείου (ή άλλου δοχείου στο οποίο παρέχονται τα ούρα) ή συνδέστε αυτό το άκρο της ταινίας με το φίλτρο χαρτιού.

Είναι αδύνατο να ξεπλύνετε τα υπερβολικά ούρα από τις ζώνες διάγνωσης.

6. Αφού λήξει ο χρόνος που αναγράφεται στην ετικέτα του δοχείου ή στις οδηγίες για κάθε δοκιμή, συγκρίνετε το χρώμα της αντίστοιχης διαγνωστικής ζώνης με την κλίμακα χρώματος στην ετικέτα του δοχείου με ρίγες (στάνταρ). Η διαδικασία δοκιμής παρουσιάζεται στα σχήματα 1-7.

7. Η αντίδραση εκτιμάται ως θετική ή αρνητική. Ή εκφράζεται αριθμητικά σε g / l. (βλ. σχέδιο αριθ. 8).