ΟΔΗΓΙΕΣ

σχετικά με τη χρήση κιτ αντιδραστηρίων για τον χρωματομετρικό προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα και στο εγκεφαλονωτιαίο υγρό με κόκκινο πυρογαλλόλης

Το κιτ περιλαμβάνει:

200 ml (2 χ 100 ml Ρ + 2 χ 2 ml βαθμονομητή)

500 ml (2 χ 250 ml Ρ + 2 χ 5 ml βαθμονομητή)

Αρχή της μεθόδου

Όταν η πρωτεΐνη αλληλεπιδρά με το κόκκινο pyrogallol και

το μολυβδαινικό νάτριο σχηματίζει ένα χρωματισμένο σύμπλοκο

της οποίας η ένταση χρώματος είναι ανάλογη προς τη συγκέντρωση

Περιεχόμενα κιτ

Αντιδραστήριο (Ρ) - ερυθρό πυρογαλλόλης σε ηλεκτρικό

προσωρινή μνήμη είναι έτοιμη για χρήση.

Βαθμονομητές - Λύσεις πρωτεϊνών χαμηλής βαθμονόμησης (0,20

g / l, που χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της μικροπρωτεϊνουρίας) και υψηλή

(0,50 g / l, που χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της πρωτεϊνουρίας)

συγκέντρωση πρωτεΐνης που περιέχει 70% αλβουμίνη και 30%

σφαιρίνη είναι έτοιμη για χρήση.

Σετ αποθήκευσης - σε θερμοκρασία 2-8 ° C σε συσκευασία

κατασκευαστή για ολόκληρη τη διάρκεια ζωής.

Σταθερότητα του αντιδραστηρίου και των βαθμονομητών

Μετά το άνοιγμα, το αντιδραστήριο είναι σταθερό για 6 μήνες, βαθμονομητές - 3 μήνες. όταν φυλάσσεται σε ερμητικά κλειστή μορφή σε θερμοκρασία 2-8 ° C σε σκοτεινό μέρος.

Κανονικές τιμές

• ούρα - έως 0.120 g / l (έως 0.141 g / ημέρα).
• εγκεφαλονωτιαίο υγρό (CSF) - 0,150-0,450 g / l.

Δείγματα για ανάλυση

Ούρα, μη αιμολυμένο CSF.

Προετοιμασία για ανάλυση

1. Το CSF και τα ούρα φυγοκεντρήθηκαν για 10 λεπτά στις 2700-4000 rpm.
2. Χρησιμοποιήστε καθαρούς, καλά πλυμένους σωλήνες για ανάλυση. Η δοκιμή για την καταλληλότητα των δοκιμαστικών σωλήνων για ανάλυση είναι η απουσία αλλαγής χρώματος στο αντιδραστήριο. Εάν το αντιδραστήριο γίνει μπλε χωρίς προσθήκη δείγματος, τα αποτελέσματα προσδιορισμού πρωτεΐνης θα υπερεκτιμηθούν. ως εκ τούτου, διανομή του αντιδραστηρίου πρώτα και στη συνέχεια προσθέστε τα ούρα.
3. Κατά τη ρύθμιση της μεθόδου, θα πρέπει να χρησιμοποιηθούν νέες κυψελίδες, επειδή δεν είναι χρωματισμένες με το αντιδραστήριο και το δείγμα αντίδρασης. Οι παλιές πλαστικές κυψελίδες (θολή, μη διαφανής) δεν είναι κατάλληλες για μέτρηση. Κυψελίδα στην πρώην, πριν από τη χρήση για τη θεραπεία της ως εξής: αντέχει 10 λεπτά σε διάλυμα έκπλυσης (200 ml διαλύματος υπεροξειδίου του υδρογόνου 5%, ή 1 ml του απορρυπαντικού) και στη συνέχεια ξεπλένονται με βρύσης και απεσταγμένο νερό όχι μικρότερη από 10 φορές. Το κιτ είναι κατάλληλο για ανάλυση σε βιοχημικούς ημιαυτόματοι και αυτόματοι αναλυτές.

Ανάλυση Μήκος κύματος: 598 (578-620) nm; μήκος οπτικής διαδρομής: 10 mm. θερμοκρασία: 18-25 ° C.

Το αντιδραστήριο και ο βαθμονομητής θα πρέπει να διατηρούνται σε θερμοκρασία δωματίου για περίπου 30 λεπτά πριν την ανάλυση.

Διαδικασία 1 (προσδιορισμός πρωτεϊνουρίας)

Τα δείγματα για ανάμιξη διατηρούνται για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (18-25 ° C). Μετρήστε την οπτική πυκνότητα των πειραματικών δειγμάτων (E) και βαθμονόμησης (EC) έναντι του δείγματος μάρτυρα (τυφλού δείγματος). Το χρώμα είναι σταθερό για 1 ώρα.

ΤΙ ΘΑ ΜΕΤΡΟΥΜΕ ΣΤΗ ΜΕΘΟΔΟ ΣΟΥΛΦΟΣΑΛΥΚΛΟΥ ΤΟΥ ΜΑΛΑΡΙΟΥ;

Στη χώρα μας χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης πρωτεΐνης στα ούρα μια στροβιλομετρική μέθοδος που χρησιμοποιεί σουλφοσαλικυλικό οξύ (σουλφοσαλικυλική μέθοδος), η οποία προτάθηκε αρχικά από τον Kingsbury F. Β. και συν-συγγραφείς το 1926. Ταυτόχρονα, τα εργαστήρια των ανεπτυγμένων χωρών πρακτικά δεν χρησιμοποιούν αυτή τη μέθοδο, με αποτέλεσμα ο εργαστηριακός ποιοτικός έλεγχος της ανάλυσης πρωτεϊνών ούρων να δείχνει μείωση του συντελεστή μεταβλητότητας. Έτσι, το 1993, το 60% των γαλλικών κλινικών διαγνωστικών εργαστηρίων διεξήγαγε τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης πρωτεΐνης ούρων χρησιμοποιώντας μια χρωματομετρική μέθοδο που χρησιμοποιεί κόκκινη χρωστική pyrogallol (μέθοδος pyrogallol) και μόνο το 10% χρησιμοποιώντας τη μέθοδο του σουλφοσαλικυλικού οξέος. Διαγνωστικά κιτ για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα, με βάση τη μέθοδο πυρογαλλόλης είναι γνωστό ότι παράγουν εταιρείες όπως iagnostics Bayer D, Beckman, Biodirect, Biocon Diagnostik, Bio - Rad Laboratories, Eurodiag, Kone, Merck, Randox, Serono, Sentinel CH, Sigma. Δυστυχώς, στη χώρα μας, για οικονομικούς λόγους και εν μέρει λόγω έλλειψης εμπειρίας, οι χρωματομετρικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης των ούρων εξακολουθούν να χρησιμοποιούνται ελάχιστα.

Ανακύπτει το ερώτημα - πόσο δικαιολογημένη είναι η άρνηση των εργαστηρίων στις ανεπτυγμένες χώρες να χρησιμοποιήσουν την απλή και, κυρίως, φθηνή μέθοδο. Για να αποσαφηνιστεί αυτό το ζήτημα, συγκρίναμε τα αποτελέσματα προσδιορισμού της συγκέντρωσης πρωτεΐνης στα ούρα των ασθενών με δύο μεθόδους: σουλφοσαλικυλικό [1] και πυρογαλλόλη [2].

Η διαδικασία για τη μέτρηση της συγκέντρωσης πρωτεΐνης με κάθε μέθοδο ήταν η ακόλουθη.

Αντιδραστήρια: διάλυμα 3% σουλφοσαλικυλικού οξέος, διάλυμα χλωριούχου νατρίου 0,9%

Βαθμονομητή (αλβουμίνη ορού βαθμονόμησης διάλυμα, 50 g / l διαλύματος χλωριούχου νατρίου, 0,9% αζίδιο του νατρίου, 0,095%) από ένα σύνολο «Uni-Test - Συνολική πρωτεΐνη» παράγεται από «Deacon DS» της τάξης των «Α / Σχετικά με το Unimed ".

Εξοπλισμός: φασματοφωτόμετρο SF-2000 που παράγεται από την OKB "Spectr".

Πορεία μέτρησης: 0,5 ml διηθημένων ούρων και 1,5 ml διαλύματος 3% σουλφοσαλικυλικού οξέος προστέθηκαν σε κυψελίδα χαλαζία με μήκος οπτικής διαδρομής 1 cm και αναδεύθηκαν. Μετά από 10 λεπτά, η οπτική πυκνότητα μετρήθηκε σε ένα φασματοφωτόμετρο σε μήκος κύματος 595 nm έναντι ενός τυφλού δείγματος (κυψελίδα με 0,5 ml ούρων και 1,5 ml διαλύματος χλωριούχου νατρίου 0,9%). Ο υπολογισμός της συγκέντρωσης πρωτεΐνης πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με το πρόγραμμα βαθμονόμησης. Για την κατασκευή του, αραιώσεις πρότυπου διαλύματος αλβουμίνης ανθρώπινου ορού σε διάλυμα χλωριούχου νατρίου 0,9% με συγκεντρώσεις: 0,025. 0,05; 0,1; 0.2; 0,3. 0,4. 0,5; 0,6. 0,7. 0.8; 0,9 g / l. Για κάθε ένα από τα παρασκευασμένα διαλύματα, η μέτρηση πραγματοποιήθηκε με τον ίδιο τρόπο όπως με ένα δείγμα ούρων. Το γράφημα βαθμονόμησης παρουσιάζεται στο σχήμα 1.

Το Σχ. 1. Καμπύλη βαθμονόμησης για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα με σουλφοσαλικυλική μέθοδο.

Χρησιμοποιήθηκε ένα εμπορικό κιτ που κατασκευάστηκε από τη Biocon Diagnostik (Γερμανία) - Fluitest USP - Πρωτεΐνη, μια εξαιρετικά ευαίσθητη μέθοδος που βασίζεται στο κόκκινο σύμπλεγμα μολυβδαινικού πυρογαλλίου.

Αντιδραστήρια: κόκκινο πυρογαλλόλης, 0,06 mmol / l, μολυβδαινικό νάτριο, 0,04 mmol / l, ρυθμιστικό ηλεκτρικό 50 mmol / l, ρΗ 2,5, απορρυπαντικά 2%. Βαθμονομητή (αλβουμίνη ορού βαθμονόμησης διάλυμα, 50 g / l διαλύματος χλωριούχου νατρίου, 0,9% αζίδιο του νατρίου, 0,095%) από ένα σύνολο «Uni-Test - Συνολική πρωτεΐνη» παράγεται από «Deacon DS» της τάξης των «Α / Σχετικά με το Unimed ". [3].

Εξοπλισμός: βιοχημικό φωτομετρικό StatFax 1904 Plus ("Awareness Technology inc.", ΗΠΑ).

Μια καμπύλη βαθμονόμησης για τη περιγραφείσα μέθοδο, σε αναλογία δείγματος / αντιδραστηρίου - 1 / 12.5 παρασκευάστηκε χρησιμοποιώντας ένα ειδικά προετοιμασμένο αλβουμίνη ορού λύσεις: 0,05? 0,4. 0,5; 0,6. 0,7. 0.8; 0,9. 1,0 g / l με αραίωση του βαθμονομητή (50 g / l) με διάλυμα χλωριούχου νατρίου 0,9% (Εικ. 2).

Εικόνα 2. Καμπύλη βαθμονόμησης για την ερυθρά μέθοδο pyrogallol, Fluitest USP αντιδραστήριο, Biocon Diagnostik (Γερμανία) με αναλογία δείγματος / αντιδραστηρίου 1 / 12,5.

Λαμβάνονται 80 μΐ από κάθε διάλυμα πρωτεΐνης και αναμιγνύονται με 1,0 ml αντιδραστηρίου. μετρούμενα ως δείγματα ούρων.

Το Σχ. 3. Διάγραμμα της συγκρισιμότητας των αποτελεσμάτων μέτρησης της περιεκτικότητας σε πρωτεΐνες στα δείγματα ούρων με μεθόδους σουλφοσαλικυλικής και πυρογαλλολης.

Η καμπύλη βαθμονόμησης για το αντιδραστήριο που παράγεται από την Unimed A / O και Biocon Diagnostik, με αναλογία δείγματος / αντιδραστηρίου 1/30, λήφθηκε χρησιμοποιώντας ειδικά παρασκευασμένα διαλύματα οροαλβουμίνης: 0,05. 0,4. 0,5; 0,6. 0,7. 0.8; 0,9. 1,0, 1,1; 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1,7. 1.75; 1,8. 1,85; 1,9; 2,0 g / l με αραίωση του βαθμονομητή (50 g / l) με διάλυμα χλωριούχου νατρίου 0,9% (Εικ. 4).

Το Σχ. 4. Καμπύλες βαθμονόμησης για το αντιδραστήριο Unimed A / O (άνω γράφημα) και Fluitest USP kit από Biocon Diagnostik (κάτω γράφημα) με αναλογία δείγματος / αντιδραστηρίου 1/30.

50 μΐ λήφθηκαν από κάθε διάλυμα πρωτεΐνης και αναμίχθηκαν με 1,5 ml αντιδραστηρίου και μετρήθηκαν ως δείγματα ούρων.

Στη μελέτη, για να επιτευχθεί η μέγιστη ευαισθησία της μεθόδου pyrogallol, χρησιμοποιήθηκε η τροποποιημένη εξαιρετικά ευαίσθητη παραλλαγή της. Για το σκοπό αυτό αυξήθηκε ο όγκος των προστιθέμενων ούρων. μέτρησης εγκεφαλικό επεισόδιο: σε όλους τους σωλήνες προστέθηκε 1 ml του αντιδραστηρίου, και στη συνέχεια ο πρώτος σωλήνας προστέθηκαν 80 μΐ απεσταγμένου ύδατος (κενό) στα υπόλοιπα σωληνάρια 80 μΐ του φυγοκεντρήθηκε ούρων επωάστηκαν σε θερμοκρασία δωματίου για 10 λεπτά και η απορρόφηση του δείγματος έναντι του τυφλού κατά Μήκος κύματος 600 nm και διαφορικό φίλτρο 650 nm

Για να συγκριθούν οι μέθοδοι για τον προσδιορισμό μετρήσεις της συγκέντρωσης πρωτείνης έγιναν στα ούρα των 60 δειγμάτων ούρων της πυρογαλλόλης και μεθόδων ασθενείς σουλφοσαλικυλικό.

Ευαισθησία των μεθόδων μέτρησης της πρωτεΐνης στα ούρα αξιολογήθηκε με εξέταση των ούρων παρασκευασμένα υδατικά διαλύματα που περιέχουν συγκέντρωση λευκωματίνης ορού χαμηλή (0 έως 0,05 g / l). Για πυρογαλλόλη και σουλφοσαλικυλικό μέθοδοι επαφής ερευνήθηκαν επίσης τη μη ειδική απορρόφηση λόγω χρώση ενός δείγματος ούρων. Για το σκοπό αυτό, η οπτική πυκνότητα μετρήθηκε με δείγματα ούρων, στο οποίο, αντί του πυρογαλλόλη ή αντιδραστηρίου σουλφοσαλικυλικό οξύ προστέθηκε μια ισοδύναμη ποσότητα φυσιολογικού ορού.

Για να εκτιμηθεί η επίδραση της μήτρας (ούρων) στα αποτελέσματα της σουλφοσαλικυλικής μεθόδου, πραγματοποιήθηκαν τα ακόλουθα πειράματα.

1) Στα δείγματα ούρων που δεν περιέχουν πρωτεΐνη, σύμφωνα με τις μεθόδους πυρογαλλόλης και σουλφοσαλικυλικού οξέος (η = 43) προστέθηκε αλβουμίνη ανθρώπινου ορού σε τελική συγκέντρωση 0,4 g / 1. Στη συνέχεια, χρησιμοποιώντας τις παραπάνω μεθόδους, προσδιορίστηκε η συγκέντρωση πρωτεΐνης στα παρασκευασμένα δείγματα.

2) Δείγματα ούρων (η = 16), που έχουν πρωτεΐνη σύμφωνα με τη μέθοδο pyrogallol, αραιώθηκαν δύο φορές με διάλυμα χλωριούχου νατρίου 0,9%. Τα ληφθέντα δείγματα επανεξετάστηκαν με την μέθοδο του σουλφοσαλικυλικού οξέος, η συγκέντρωση της πρωτεΐνης επανυπολογίστηκε για αραίωση.

Αποτελέσματα έρευνας και συζήτηση

Μια μελέτη των δειγμάτων ούρων που περιείχαν συγκεκριμένες συγκεντρώσεις λευκωματίνης έδειξε ότι η ελάχιστη ανιχνεύσιμη συγκέντρωση λευκωματίνης (ευαισθησία μεθόδου) ήταν 0,033 g / l για τη σουλφοσαλικυλική μέθοδο και 0,012 g / l για τη μέθοδο pyrogallol.

Τα αποτελέσματα των μετρήσεων, με τη μορφή ενός διαγράμματος συγκρίσιμων αποτελεσμάτων των μετρήσεων της περιεκτικότητας σε πρωτεΐνες σε σουλφοσαλικυλικό ούρα (τεταγμένη άξονας) και τα δείγματα πυρογαλλόλης (χ-άξονας) με τις μεθόδους που δείχνονται στο Σχήμα 3. Η συνεχής κεκλιμένο γραμμή σε ένα γράφημα των αποτελεσμάτων μέτρησης αντιστοιχεί στην ισότητα δύο μεθόδους. Εάν και οι δύο μέθοδοι έδωσαν παρόμοιες τιμές, τότε τα σημεία στο γράφημα θα πρέπει να ομαδοποιηθούν κοντά στην σταθερή γραμμή. Τα δεδομένα που φαίνονται στο Σχ. 3, μπορούμε επίσης να σημειώσουμε ότι η σουλφοσαλικυλική μέθοδος έδειξε σταθερά χαμηλότερες συγκεντρώσεις πρωτεΐνης σε όλα τα δείγματα ούρων σε σύγκριση με τη μέθοδο pyrogallol.

Όπως έδειξε η μελέτη, μεταξύ των αποτελεσμάτων που ελήφθησαν με μεθόδους σουλφοσαλικυλικού και πυρογαλλολίου, δεν υπάρχει πειστική στατιστική σύνδεση. Επιπλέον, σε σύγκριση με τη μέθοδο pyrogallol, η σουλφοσαλικυλική μέθοδος στο 95% των δειγμάτων ούρων έδειξε χαμηλότερες τιμές συγκέντρωσης πρωτεΐνης. Ταυτόχρονα, σε 86% των περιπτώσεων, η μέτρηση με τη μέθοδο του σουλφοσαλικυλικού οξέος έδωσε υποτιμημένα αποτελέσματα δύο ή περισσότερες φορές σε σύγκριση με τη μέθοδο pyrogallol.

Ταυτόχρονα, η σουλφοσαλικυλική μέθοδος σε ορισμένες περιπτώσεις έδειξε την παρουσία πρωτεΐνης στο δείγμα λόγω του σκούρου χρώματος ή της αυξημένης θολερότητας των ούρων που μελετήθηκαν. Διαπιστώθηκε ότι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης με τη μέθοδο του σουλφοσαλικυλικού οξέος (λόγος δείγματος / αντιδραστηρίου = 1/3) σε μήκος κύματος 595 nm, η συνεισφορά του δείγματος ούρων λόγω του χρώματος ή της θολερότητας στο αποτέλεσμα μπορεί να είναι από 0 έως 0,247 g / l (μέση τιμή - 0,031 g / 1). Έτσι, θα πρέπει να αναγνωριστεί ότι όταν χρησιμοποιείται η σουλφοσαλικυλική μέθοδος, είναι υποχρεωτική η χρήση δείγματος ελέγχου (δείγμα ούρων + φυσιολογικό ορό) για κάθε δείγμα ούρων. Κατά τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης με τη μέθοδο pyrogallol, το χρώμα ή ο βαθμός θολερότητας του δείγματος ούρων δεν επηρέασε το αποτέλεσμα.

Πείραμα για την εκτίμηση της επίδρασης της μήτρας (ούρα) έδειξε ότι σε σχεδόν όλα τα παρασκευασμένα δείγματα ούρων που περιείχαν 0,4 g / l αλβουμίνης, η συγκέντρωσή της, που καθορίστηκε με την σουλφοσαλικυλική μέθοδο, ήταν κάτω από 0,4 g / l κατά μέσο όρο κατά 20% συγκέντρωση πρωτεΐνης 0,29-0,34 g / l). Ταυτόχρονα, όταν μετρήθηκε η συγκέντρωση πρωτεΐνης σε αυτά τα δείγματα με τη μέθοδο pyrogallol, τα αποτελέσματα για όλα τα δείγματα ήταν στην περιοχή από 0,40-0,46 g / l. Επίσης, κατά την εκτίμηση της επίδρασης της μήτρας (ούρων) στα αποτελέσματα της μέτρησης της συγκέντρωσης πρωτεΐνης με τη σουλφοσαλικυλική μέθοδο, βρέθηκε ότι σε 5 από τα 16 διπλά αραιωμένα δείγματα ούρων η συγκέντρωση πρωτεΐνης ήταν 15-33% υψηλότερη από ό, τι στα αντίστοιχα μη αραιωμένα δείγματα. Για την τελική αποσαφήνιση της επίδρασης της μήτρας στα αποτελέσματα της σουλφοσαλικυλικής μεθόδου απαιτείται έρευνα σε μεγάλο αριθμό δειγμάτων ούρων.

Έτσι, τα ληφθέντα δεδομένα υποδεικνύουν τα πλεονεκτήματα της μεθόδου πυρογαλλολης έναντι της σουλφοσαλικυλικής μεθόδου λόγω της υψηλότερης ευαισθησίας και μη ευαισθησίας σε παρεμβατικούς παράγοντες, χωρίς ανάγκη για τυφλό δείγμα ούρων, τη δυνατότητα χρήσης ενός προτύπου για την κατασκευή μιας καμπύλης βαθμονόμησης και μιας μικρής ποσότητας ούρων για ανάλυση. Η παρουσία τέτοιων χαρακτηριστικών μας επιτρέπει να προτείνουμε τη μέθοδο pyrogallol για ευρεία χρήση στην εργαστηριακή πρακτική.

Από τα ληφθέντα δεδομένα προκύπτει ένα συμπέρασμα: τα αποτελέσματα της μέτρησης της συγκέντρωσης πρωτεΐνης στα ούρα με τη μέθοδο του σουλφοσαλικυλικού είναι ασύγκριτα με τα αποτελέσματα που λαμβάνονται με τη μέθοδο pyrogallol. Αυτό το γεγονός είναι η απάντηση στην ερώτηση - γιατί τα εργαστήρια των ανεπτυγμένων χωρών δεν χρησιμοποιούν τη σουλφοσαλικυλική μέθοδο. Η εφαρμογή αυτής της μεθόδου σε υποανάπτυκτες χώρες, προφανώς, εξηγείται από το γεγονός ότι ο συντελεστής τιμών επικρατεί έναντι της ακρίβειας και της διαγνωστικής σημασίας των ληφθέντων αποτελεσμάτων και, λαμβάνοντας υπόψη τα στοιχεία που παρουσιάζονται στο σχ. 3 αποτελέσματα, μπορεί να ειπωθεί, και πάνω από την κοινή λογική. Ποιος χρειάζεται μια τέτοια ανάλυση, όταν η συγκέντρωση πρωτεΐνης στα ούρα είναι 0,3 g / l, το αποτέλεσμα μέτρησης μπορεί να είναι από 0,05 έως 0,25 g / l; Όσο για τον παράγοντα των τιμών, τότε, όπως γνωρίζετε, ο κακοποιός πληρώνει δύο φορές. Τα λανθασμένα αποτελέσματα της ανάλυσης οδηγούν σε εσφαλμένη διάγνωση και αναποτελεσματική θεραπεία του ασθενούς. Ο κύριος κίνδυνος της χρήσης της σουλφοσαλικυλικής μεθόδου είναι ότι παίρνουμε σημαντικά υποτιμημένες τιμές και ότι σπανίως δεν χάσουμε πρωτεϊνουρία. Επομένως, αυτή η μέθοδος δεν μπορεί να εφαρμοστεί ακόμη και για την προβολή.

Τι μετράμε λοιπόν με τη μέθοδο του σουλφοσαλικυλικού οξέος; Η μέθοδος ανήκει στην τάξη του θολομετρικού, με βάση τη μέτρηση της μεταβολής της εκπομπής φωτός (DD) του μείγματος αντίδρασης λόγω της σκέδασης του φωτός (θολερότητα). Στην περίπτωση ανίχνευσης πρωτεΐνης στα ούρα, σχηματίζεται θολότητα λόγω της ακόλουθης διαδικασίας: μόρια πρωτεϊνών ούρων σε όξινο περιβάλλον μετουσιώνονται, κινούνται από μία συμπαγή σφαιρική μορφή σε μία χαλαρή "νηματοειδή" μορφή. Ταυτόχρονα, η ικανότητα του σχηματισμού συγκροτημάτων αυξάνεται απότομα (αντίδραση κατακρήμνισης) στις πρωτεΐνες. Τα μεμονωμένα μόρια πρωτεΐνης είναι μικρότερα από το μήκος κύματος του ορατού φωτός και επομένως το διασκορπίζουν πολύ ασθενώς. Η απόδοση διασκορπισμού αυξάνεται δραματικά όταν το μέγεθος των προκύπτοντων συσσωματωμάτων μορίων πρωτεΐνης πλησιάζει την τιμή των 0,6 μm (το μήκος κύματος του φωτός ανίχνευσης). Όσο μεγαλύτερη είναι η συγκέντρωση πρωτεΐνης στα ούρα, τόσο μεγαλύτερος είναι ο αριθμός αυτών των συγκροτημάτων (κέντρα διασκορπισμού). Ωστόσο, η σχέση μεταξύ της οπτικής πυκνότητας D D που μετράται σε ένα φωτομέτρο και η συγκέντρωση της πρωτεΐνης στα ούρα είναι πολύ περίπλοκη. Στο αρχικό στάδιο της αντίδρασης, σχηματίζεται μια ορισμένη ποσότητα σωματιδίων μικρής πρωτεΐνης, τότε αρχίζουν να κολλάνε μαζί σε μεγαλύτερα σωματίδια, ενώ η συγκέντρωση των κέντρων σκέδασης μειώνεται και η απόδοση (διατομή) της διασποράς κάθε κέντρου αυξάνεται. Σε κάθε δεδομένη στιγμή, έχουμε στο μίγμα αντίδρασης έναν ορισμένο αριθμό κέντρων σκέδασης με διαφορετικά μεγέθη. Σε υψηλές συγκεντρώσεις πρωτεΐνης στα ούρα μπορούν να σχηματιστούν μεγάλα σωματίδια πρωτεΐνης που καθιζάνουν, πράγμα που οδηγεί σε μείωση της οπτικής πυκνότητας του μίγματος αντίδρασης.

Η διαδικασία μετουσίωσης πρωτεϊνών και η αντίδραση της καθίζησης εξαρτώνται από τη σύνθεση του μέσου στο οποίο εμφανίζονται (ρΗ, συγκέντρωση διαφόρων αλάτων). Για τη βαθμονόμηση της μεθόδου, χρησιμοποιούμε ένα υδατικό διάλυμα ανθρώπινης λευκωματίνης με την προσθήκη χλωριούχου νατρίου 0,9%. Όταν μετράμε τη συγκέντρωση της πρωτεΐνης στα ούρα, δεν γνωρίζουμε και δεν λαμβάνουμε υπόψη ούτε το pH των ούρων ούτε τη σύνθεση του άλατος. Επίσης, δεν λαμβάνουμε υπόψη το γεγονός ότι διαφορετικές πρωτεΐνες αντιδρούν διαφορετικά στο διάλυμα σουλφοσαλικυλικού οξέος. Αυτό εξηγεί τη μεγάλη διασπορά των αποτελεσμάτων μέτρησης που παρουσιάζεται στο Σχ. 3. Όσο πιο κοντά είναι η σύνθεση των ούρων στη σύνθεση του βαθμονομητή, τόσο πιο ακριβές είναι το αποτέλεσμα της μέτρησης. Ωστόσο, υπάρχουν πολύ λίγα τέτοια δείγματα ούρων. Στις περισσότερες περιπτώσεις, η σύνθεση των ούρων είναι τέτοια που τα αποτελέσματα των μετρήσεων υποτιμώνται και συχνά είναι αρκετά σημαντικά.

Η τελευταία επιβεβαιώνεται από το πείραμα που περιγράφηκε παραπάνω, στο οποίο η συγκέντρωση πρωτεΐνης μετρήθηκε με τη μέθοδο της σουλφοσαλικυλικής ουσίας σε δείγματα μη αραιωμένων και διπλά αραιωμένων ούρων. Μια σύγκριση των ληφθέντων στοιχείων έδειξε ότι η αραίωση των ούρων (λαμβάνοντας υπόψη το βαθμό αραίωσης) οδηγεί σε αύξηση των αποτελεσμάτων των μετρήσεων της συγκέντρωσης πρωτεϊνών κατά 15-33%. Το γεγονός αυτό επιβεβαιώνει τη σημαντική επίδραση της σύνθεσης των ούρων στο αποτέλεσμα του προσδιορισμού της συγκέντρωσης της πρωτεΐνης (αποτέλεσμα της μήτρας).

Γιατί η μέθοδος pyrogallol επιτρέπει την επίτευξη ακριβέστερων αποτελεσμάτων μέτρησης της συγκέντρωσης πρωτεΐνης στα ούρα; Πρώτον, λόγω της μεγαλύτερης πολλαπλότητας αραίωσης δειγμάτων ούρων στο μείγμα της αντίδρασης. Εάν στη σουλφοσαλικυλική μέθοδο η αναλογία δείγματος / αντιδραστηρίου ούρων είναι 1/3, τότε στη μέθοδο pyrogallol μπορεί να κυμαίνεται από 1 / 12,5 έως 1/60, ανάλογα με την παραλλαγή της τεχνικής, η οποία μειώνει σημαντικά την επίδραση της σύνθεσης ούρων στο αποτέλεσμα μέτρησης. Δεύτερον, η αντίδραση προχωρά σε ρυθμιστικό ηλεκτρικό, δηλαδή, σε σταθερό ρΗ. Τέλος, η ίδια η αρχή της μεθόδου, εάν μπορεί να λεχθεί, είναι πιο διαφανής. Το μολυβδαινικό νάτριο και η κόκκινη χρωστική πυρογαλλολών σχηματίζουν ένα σύμπλοκο με ένα πρωτεϊνικό μόριο. Αυτό οδηγεί στο γεγονός ότι τα μόρια χρωστικής, σε ελεύθερη κατάσταση, δεν απορροφούν φως σε μήκος κύματος 600 nm, σε συνδυασμό με πρωτεΐνη, απορροφούν το φως. Έτσι, φαίνεται να σημειώνουμε κάθε πρωτεϊνικό μόριο με βαφή και ως αποτέλεσμα διαπιστώνουμε ότι η μεταβολή στην οπτική πυκνότητα του μίγματος αντίδρασης σε μήκος κύματος 600 nm σχετίζεται μοναδικά με τη συγκέντρωση πρωτεΐνης στα ούρα.

Συμπερασματικά, οι σημαντικότερες διαφορές μεταξύ της σουλφοσαλικυλικής μεθόδου για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα και της μεθόδου που χρησιμοποιεί την κόκκινη χρωστική πυρογαλλολών παρουσιάζονται στον Πίνακα 1.

Tab. Νο. 1. Συγκριτικά χαρακτηριστικά δύο μεθόδων για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα (μέθοδοι σουλφοσαλικυλικού και πυρογαλλόλης)

Προσδιορισμός της πρωτεΐνης των ούρων με κόκκινο pyrogallol

Η αρχή της μεθόδου βασίζεται στη φωτομετρική μέτρηση της οπτικής πυκνότητας ενός διαλύματος ενός έγχρωμου συμπλόκου που σχηματίζεται από την αλληλεπίδραση μορίων πρωτεΐνης με μόρια του συμπλόκου κόκκινου χρωστικού πυρογαλλόλης και μολυβδαινικού νατρίου (σύμπλοκο Pyrogallol Red-Molybdate) σε όξινο περιβάλλον. Η ένταση χρώματος του διαλύματος είναι ανάλογη με την περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη στο υπό μελέτη υλικό. Η παρουσία απορρυπαντικών στο αντιδραστήριο παρέχει έναν ισοδύναμο ορισμό πρωτεϊνών διαφορετικής φύσης και δομής.

Αντιδραστήρια. 1) διάλυμα 1,5 mmol / l ερυθρο πυρογαλλολης (PGA): 60 mg PGA διαλύονται σε 100 ml μεθανόλης. Φυλάσσεται σε θερμοκρασία 0-5 ° C. 2) Διάλυμα ρυθμιστικού διαλύματος ηλεκτρικού 50 mmol / l ρΗ 2,5: 5,9 g ηλεκτρικού οξέος (HOOC-CH₂-CH₂-COOH); 0,14 g οξαλικού νατρίου (Na₂Γ₂Ο₄) και 0,5 g βενζοϊκού νατρίου (C₆H₅COONa) διαλύεται σε 900 ml απεσταγμένου νερού. 3) 10 mmol / 1 διαλύματος κρυσταλλικού πυριτίου μολυβδικού νατρίου (Na₂Moo₄ Χ 2Η₂O): 240 mg μολυβδαινικού νατρίου διαλύονται σε 100 ml απεσταγμένου νερού. 4) Αντιδραστήριο εργασίας: σε 900 ml ρυθμιστικού διαλύματος ηλεκτρικού άλατος προστίθενται 40 ml διαλύματος PHC και 4 ml διαλύματος μολυβδαινικού νατρίου. Το ρΗ του διαλύματος ρυθμίζεται στο 2,5 με διάλυμα υδροχλωρικού οξέος (HCl) 0,1 mol / l και ο όγκος του ρυθμίζεται σε 1 λίτρο. Το αντιδραστήριο σε αυτή τη μορφή είναι έτοιμο για χρήση και είναι σταθερό όταν φυλάσσεται σε σκοτεινό μέρος και σε θερμοκρασία 2-25 ° C για 6 μήνες. 5) 0,5 g / l πρότυπου διαλύματος αλβουμίνης.

Η πορεία του προσδιορισμού. Στο πρώτο δοκιμαστικό σωλήνα εισάγονται 0,05 ml από τα ούρα που μελετήθηκαν, προστίθενται 0,05 ml πρότυπου διαλύματος λευκωματίνης στο δεύτερο δοκιμαστικό σωλήνα και 0,05 ml αποσταγμένου νερού στον τρίτο δοκιμαστικό σωλήνα (δείγμα ελέγχου), στη συνέχεια προστίθενται 3 ml αντιδραστηρίου εργασίας σε αυτούς τους δοκιμαστικούς σωλήνες. Τα περιεχόμενα των σωλήνων αναμιγνύονται και μετά από 10 λεπτά, το δείγμα και το πρότυπο φωτομετρείται έναντι ενός δείγματος ελέγχου σε μήκος κύματος 596 nm σε κυψελίδα με μήκος οπτικής διαδρομής 10 mm.

Ο υπολογισμός της συγκέντρωσης πρωτεΐνης στο αναλυθέν δείγμα ούρων πραγματοποιείται σύμφωνα με τον τύπο:

όπου C είναι η συγκέντρωση πρωτεΐνης στο αναλυθέν δείγμα ούρων, g / l. Α_pr και α_st- απόσβεση του μελετώμενου δείγματος ούρων και πρότυπου διαλύματος αλβουμίνης, g / l, 0,5 - συγκέντρωση πρότυπου διαλύματος αλβουμίνης, g / l.

• το χρώμα του διαλύματος (σύμπλοκο χρώματος) είναι σταθερό για μία ώρα.
• η άμεση αναλογική σχέση μεταξύ της συγκέντρωσης πρωτεΐνης στο δείγμα και της απορρόφησης του διαλύματος εξαρτάται από τον τύπο του φωτομέτρου.
• όταν η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες στα ούρα είναι μεγαλύτερη από 3 g / l, το δείγμα αραιώνεται με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου (9 g / l) και ο προσδιορισμός επαναλαμβάνεται. Ο βαθμός αραίωσης λαμβάνεται υπόψη κατά τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης πρωτεΐνης.

Φροντίζουμε το συκώτι

Θεραπεία, συμπτώματα, φάρμακα

Pyrogallol κόκκινο προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα

02.26.2009

Kurilyak O.A., Ph.D.

Κανονικά, η πρωτεΐνη απεκκρίνεται στα ούρα σε σχετικά μικρή ποσότητα, συνήθως όχι μεγαλύτερη από 100-150 mg / ημέρα.

Η ημερήσια διούρηση σε ένα υγιές άτομο είναι 1000-1500 ml / ημέρα. Έτσι, η συγκέντρωση πρωτεΐνης κάτω από φυσιολογικές συνθήκες είναι 8-10 mg / dL (0,08-0,1 g / l).

Η ολική πρωτεΐνη ούρων αντιπροσωπεύεται από τρία κύρια κλάσματα - λευκωματίνη, βλεννοπρωτεΐνες και σφαιρίνες.

Η λευκωματίνη ούρων είναι το τμήμα της αλβουμίνης του ορού που έχει διηθηθεί στα σπειράματα και δεν έχει αναρροφηθεί στους νεφρούς σωληνάρια. στην κανονική απέκκριση της λευκωματίνης στα ούρα είναι μικρότερη από 30 mg / ημέρα. Μια άλλη σημαντική πηγή πρωτεΐνης στα ούρα είναι οι νεφρικές σωληνώσεις, ειδικά το περιφερικό μέρος των σωληναρίων. Αυτά τα σωληνάρια εκκρίνουν τα δύο τρίτα της συνολικής ποσότητας πρωτεΐνης ούρων. περίπου αυτής της ποσότητας, περίπου το 50% αντιπροσωπεύεται από τη γλυκοπρωτεΐνη Tamm-Horsfall, η οποία εκκρίνεται από το επιθήλιο των απομακρυσμένων σωληναρίων και παίζει σημαντικό ρόλο στο σχηματισμό των πετρών της ουρήθρας. Άλλες πρωτεΐνες είναι παρούσες στα ούρα και σε μία ελάσσονα ποσότητα που προέρχεται από το διηθείται μέσω φίλτρου νεφρικής πλάσμα πρωτεΐνες χαμηλού μοριακού βάρους που δεν επαναπορροφάται στα νεφρικά σωληνάρια, μικροσφαιρίνη από νεφρική σωληναριακή επιθήλιο (RTE), και του προστάτη και το κολπικό υγρό.

Η πρωτεϊνουρία, δηλαδή η αύξηση της περιεκτικότητας σε πρωτεΐνες στα ούρα είναι ένα από τα σημαντικότερα συμπτώματα που αντικατοπτρίζει τη βλάβη των νεφρών. Ωστόσο, ορισμένες άλλες καταστάσεις μπορεί επίσης να συνοδεύονται από πρωτεϊνουρία. Επομένως, υπάρχουν δύο κύριες ομάδες πρωτεϊνουρίας: νεφρική (αληθής) και εξωρενική (ψευδής) πρωτεϊνουρία.

Στη νεφρική πρωτεϊνουρία, η πρωτεΐνη εισέρχεται στα ούρα απευθείας από το αίμα λόγω της αύξησης της διαπερατότητας του σπειραματικού φίλτρου. Νεφρική πρωτεϊνουρία εμφανίζεται συχνά σε σπειραματονεφρίτιδα, νέφρωση, πυελονεφρίτιδα, νεφροσκλήρυνση, νεφρική αμυλοείδωση, διάφορες μορφές νεφροπάθεια, νεφροπάθεια έγκυες π.χ., εμπύρετη συνθήκες, υπέρταση, κλπ Η πρωτεϊνουρία μπορεί επίσης να βρεθεί σε υγιείς ανθρώπους μετά από έντονη σωματική άσκηση, υποθερμία και ψυχολογικό στρες. Στα νεογέννητα, παρατηρείται φυσιολογική πρωτεϊνουρία τις πρώτες εβδομάδες της ζωής και όταν η ασθένεια εμφανίζεται σε παιδιά και εφήβους, είναι δυνατή η ορθοστατική πρωτεϊνουρία (σε όρθια θέση του σώματος) σε συνδυασμό με την ταχεία ανάπτυξη μεταξύ των ηλικιών των 7 και των 18 ετών.

Σε περίπτωση ψευδούς (εξωγενής) πρωτεϊνουρίας, η πηγή πρωτεΐνης στα ούρα είναι ένα μίγμα λευκοκυττάρων, ερυθροκυττάρων, επιθηλιακών κυττάρων του ουροθηλίου της ουροφόρου οδού. Η αποσύνθεση αυτών των στοιχείων, ιδιαίτερα έντονη με αλκαλικά ούρα, οδηγεί στην είσοδο πρωτεΐνης στα ούρα, η οποία έχει ήδη περάσει το νεφρικό φίλτρο. Ιδιαίτερα υψηλός βαθμός λανθασμένης πρωτεϊνουρίας δίνει αίμα στα ούρα, με άφθονη αιματουρία, μπορεί να φτάσει τα 30 g / l και περισσότερο. Ασθένειες που μπορεί να συνοδεύονται από εξωγενή πρωτεϊνουρία - ουρολιθίαση, νεφρική φυματίωση, όγκους νεφρών ή ουροφόρων οδών, κυστίτιδα, πυελίτιδα, προστατίτιδα, ουρηθρίτιδα, αιδοιοκολπίτιδα.

Η κλινική ταξινόμηση περιλαμβάνει ήπια πρωτεϊνουρία (μικρότερη από 0,5 g / ημέρα), μέτρια (από 0,5 έως 4 g / ημέρα). Ή σοβαρή (πάνω από 4 g / ημέρα).

Οι περισσότεροι ασθενείς με νεφρική νόσο, όπως οξεία σπειραματονεφρίτιδα ή πυελονεφρίτιδα, αποκαλύπτουν μέτρια πρωτεϊνουρία, αλλά οι ασθενείς με νεφρωσικό σύνδρομο συνήθως εκκρίνουν περισσότερα από 4 g πρωτεΐνης στα ούρα καθημερινά.

Για τον ποσοτικό προσδιορισμό της πρωτεΐνης, χρησιμοποιείται μια ευρεία ποικιλία μεθόδων, ειδικότερα, η ενοποιημένη μέθοδος Brandberg-Roberts-Stolnikov, η μέθοδος διουρίας, η μέθοδος σουλφοσαλικυλικού οξέος, οι μέθοδοι που χρησιμοποιούν μπλε χρωστική Coomassie, κόκκινη βαφή πυρογαλλόλης κλπ.

Η χρήση διαφόρων μεθόδων για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα έχει οδηγήσει σε σοβαρή σύγχυση στην ερμηνεία των ορίων του κανόνα της περιεκτικότητας σε πρωτεΐνες στα ούρα. Επειδή δύο μέθοδοι χρησιμοποιούνται συχνότερα σε εργαστήρια - με το σουλφοσαλικυλικό οξύ και την κόκκινη χρωστική pyrogallol, θεωρούμε το πρόβλημα της ορθότητας των ορίων των προτύπων γι 'αυτά. Από την άποψη της σουλφοσαλικυλικής μεθόδου σε φυσιολογικά ούρα, η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 0,03 g / l, και από την άποψη της pyrogallol, 0,1 g / l! Οι διαφορές είναι τριπλές.

Χαμηλές τιμές της κανονικής συγκέντρωσης πρωτεϊνών στα ούρα όταν χρησιμοποιούνται σουλφοσαλικυλικά λόγω των ακόλουθων σημείων:

• η καμπύλη βαθμονόμησης βασίζεται σε υδατικό διάλυμα λευκωματίνης. Τα ούρα στη σύνθεση του είναι πολύ διαφορετικά από το νερό: pH, άλας, ενώσεις χαμηλού μοριακού βάρους (κρεατινίνη, ουρία, κλπ.). Ως αποτέλεσμα, σύμφωνα με τους Altshuler, Rakov και Tkachev, ένα σφάλμα στον προσδιορισμό της πρωτεΐνης ούρων μπορεί να είναι 3 φορές ή περισσότερο! Δηλαδή σωστά αποτελέσματα μπορούν να ληφθούν μόνο σε περιπτώσεις όπου τα ούρα έχουν πολύ χαμηλό ειδικό βάρος και η σύνθεσή τους και το pH πλησιάζουν το νερό.
• η υψηλότερη ευαισθησία της σουλφοσαλικυλικής μεθόδου στη λευκωματίνη σε σύγκριση με άλλες πρωτεΐνες (εκείνη την εποχή, όπως αναφέρθηκε παραπάνω, η αλβουμίνη στα φυσιολογικά δείγματα ούρων δεν είναι μεγαλύτερη από το 30% της ολικής πρωτεΐνης ούρων).
• εάν το ρΗ των ούρων μετατοπιστεί στην αλκαλική πλευρά, το σουλφοσαλικυλικό οξύ εξουδετερώνεται, γεγονός που προκαλεί επίσης μείωση των αποτελεσμάτων του προσδιορισμού της πρωτεΐνης.
• ο ρυθμός καθίζησης των ιζημάτων υπόκειται σε σημαντικές διακυμάνσεις - σε χαμηλές συγκεντρώσεις πρωτεϊνών, η καθίζηση επιβραδύνεται και ο πρώιμος τερματισμός της αντίδρασης οδηγεί σε υποτίμηση του αποτελέσματος.
• ο ρυθμός της αντίδρασης καθίζησης εξαρτάται ουσιαστικά από την ανάμιξη του μίγματος αντίδρασης. Σε υψηλές συγκεντρώσεις πρωτεϊνών, η έντονη ανάδευση του σωλήνα μπορεί να οδηγήσει στο σχηματισμό μεγάλων νιφάδων και στην ταχεία καθίζηση τους.

Όλα τα παραπάνω χαρακτηριστικά της μεθόδου οδηγούν σε σημαντική υποεκτίμηση της συγκέντρωσης πρωτεΐνης που προσδιορίζεται στα ούρα. Ο βαθμός υποεκτέλεσης εξαρτάται έντονα από τη σύνθεση ενός συγκεκριμένου δείγματος ούρων. Δεδομένου ότι η μέθοδος του σουλφοσαλικυλικού οξέος δίνει υποτιμημένη τιμή συγκέντρωσης πρωτεϊνών, το φυσιολογικό όριο για τη μέθοδο αυτή είναι επίσης 0,03 g / l περίπου τριπλάσιο σε σύγκριση με τα δεδομένα που δίνονται στα βιβλία αναφοράς για την κλινική εργαστηριακή διάγνωση.

Η συντριπτική πλειοψηφία των εργαστηρίων στις δυτικές χώρες έχουν εγκαταλείψει τη χρήση της σουλφοσαλικυλικής μεθόδου για τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης πρωτεΐνης στα ούρα και την ενεργή χρήση της μεθόδου pyrogallol για το σκοπό αυτό. μέθοδο πυρογαλλόλης για τον προσδιορισμό της πρωτεϊνικής συγκέντρωσης στα ούρα και άλλα βιολογικά υγρά βασίζεται στην φωτομετρική αρχή, μετρώντας την οπτική πυκνότητα του κεχρωσμένου συμπλόκου που σχηματίζεται από την αλληλεπίδραση των μορίων πρωτεΐνης και σύνθετων χρωστική πυρογαλλόλης κόκκινο και νάτριο μολυβδικό (σύμπλοκο πυρογαλλόλη Red-Μολυβδαινικό).

Γιατί η μέθοδος pyrogallol επιτρέπει την επίτευξη ακριβέστερων αποτελεσμάτων μέτρησης της συγκέντρωσης πρωτεΐνης στα ούρα; Πρώτον, λόγω της μεγαλύτερης πολλαπλότητας αραίωσης δειγμάτων ούρων στο μείγμα της αντίδρασης. Εάν στη σουλφοσαλικυλική μέθοδο η αναλογία δείγματος / αντιδραστηρίου ούρων είναι 1/3, τότε στη μέθοδο pyrogallol μπορεί να κυμαίνεται από 1 / 12,5 έως 1/60, ανάλογα με την παραλλαγή της τεχνικής, η οποία μειώνει σημαντικά την επίδραση της σύνθεσης ούρων στο αποτέλεσμα μέτρησης. Δεύτερον, η αντίδραση προχωρά σε ρυθμιστικό ηλεκτρικό, δηλαδή, σε σταθερό ρΗ. Και, τέλος, η ίδια η αρχή της μεθόδου μπορεί να λεχθεί ότι είναι πιο «διαφανής». Το μολυβδαινικό νάτριο και η κόκκινη χρωστική πυρογαλλολών σχηματίζουν ένα σύμπλοκο με ένα πρωτεϊνικό μόριο. Αυτό οδηγεί στο γεγονός ότι τα μόρια χρωστικής στην ελεύθερη κατάσταση που δεν απορροφούν φως σε μήκος κύματος 600 nm σε συνδυασμό με πρωτεΐνη απορροφούν το φως. Επομένως, φαίνεται να σημειώνουμε κάθε πρωτεϊνικό μόριο με μια βαφή και, ως αποτέλεσμα, βλέπουμε ότι η μεταβολή στην οπτική πυκνότητα του μίγματος αντίδρασης σε μήκος κύματος 600 nm συσχετίζεται σαφώς με τη συγκέντρωση πρωτεΐνης στα ούρα. Επιπλέον, επειδή η συγγένεια του κόκκινου πυρογαλλολ σε διαφορετικά κλάσματα πρωτεΐνης είναι σχεδόν η ίδια, η μέθοδος επιτρέπει τον προσδιορισμό της ολικής πρωτεΐνης ούρων. Ως εκ τούτου, το όριο των φυσιολογικών τιμών της συγκέντρωσης πρωτεϊνών στα ούρα είναι 0,1 g / l (ενδείκνυται σε όλες τις σύγχρονες κατευθυντήριες οδηγίες της Western για κλινική και εργαστηριακή διάγνωση, συμπεριλαμβανομένου του Κλινικού εγχειριδίου για εργαστηριακές εξετάσεις, που εκδόθηκε από τον N. Tits). Τα συγκριτικά χαρακτηριστικά των μεθόδων πυρογαλλίνης και σουλφοσαλικυλικών για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης ούρων παρουσιάζονται στον Πίνακα 1.

Εν κατακλείδι, θα ήθελα να επικεντρωθώ εκ νέου στο γεγονός ότι όταν το εργαστήριο μεταβαίνει από τη σουλφοσαλικυλική μέθοδο για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης ούρων στη μέθοδο pyrogallol, το όριο των φυσιολογικών τιμών αυξάνεται σημαντικά (από 0,03 g / l σε 0,1 g / l!). Αυτό το προσωπικό του εργαστηρίου θα πρέπει βεβαίως να ενημερώσει τους κλινικούς γιατρούς, διότι Σε αυτή την περίπτωση, η διάγνωση της πρωτεϊνουρίας μπορεί να γίνει μόνο στην περίπτωση που η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες στα ούρα υπερβαίνει τα 0,1 g / l.

3. Προσδιορισμός της πρωτεΐνης.

Αρχή της μεθόδου με βάση την πήξη της πρωτεΐνης στα ούρα παρουσία νιτρικού (ή 20% διαλύματος σουλφοσαλικυλικού) οξέος.

Πρόοδος εργασίας: σε 5 σταγόνες ούρων προσθέστε 1-2 σταγόνες νιτρικού (ή σουλφοσαλικυλικού) οξέος. Παρουσία πρωτεΐνης στα ούρα εμφανίζεται θολότητα.

Πίνακας Ανίχνευση παθολογικών συστατικών των ούρων.

Σημείωση: παρουσία γλυκόζης και πρωτεΐνης στα εξετασθέντα ούρα, προσδιορίζεται το ποσοτικό τους περιεχόμενο.

Ποσοτικός προσδιορισμός της πρωτεΐνης στα ούρα με τη χρωματομετρική μέθοδο με ερυθρό pyrogallol.

Αρχή της μεθόδου: Όταν η πρωτεΐνη αλληλεπιδρά με το κόκκινο πυρογαλλόλης και το μολυβδαινικό νάτριο, σχηματίζεται ένα χρωματισμένο σύμπλεγμα, η ένταση χρώματος, η οποία είναι ανάλογη με τη συγκέντρωση πρωτεΐνης στο δείγμα.

Αντιδραστήρια: Αντιδραστήριο εργασίας - ερυθρό διάλυμα πυρογαλλολης σε ρυθμιστικό ηλεκτρικού οξέος, διάλυμα πρωτεϊνών βαθμονόμησης με συγκέντρωση 0,50 g / l

Τα δείγματα αναμιγνύονται και κρατούνται για 10 λεπτά. σε θερμοκρασία δωματίου (18-25 ° C). Μετρήστε την οπτική πυκνότητα (D_op) και δείγμα βαθμονόμησης (D_να) έναντι του δείγματος ελέγχου σε λ = 598 (578-610) nm. Ο χρωματισμός είναι σταθερός για 1 ώρα.

Υπολογισμός: η συγκέντρωση πρωτεΐνης στα ούρα (C) g / l υπολογίζεται από τον τύπο:

Κανονικές τιμές: έως 0.094 g / l, (0.141 g / ημέρα)

Ποσοτικός προσδιορισμός της γλυκόζης στα ούρα με τη μέθοδο οξειδάσης γλυκόζης.

Αρχή της μεθόδου: Όταν η D-γλυκόζη οξειδώνεται με ατμοσφαιρικό οξυγόνο υπό την επίδραση της οξειδάσης γλυκόζης, σχηματίζεται μια ισομοριακή ποσότητα υπεροξειδίου του υδρογόνου. Υπό τη δράση της υπεροξειδάσης, το υπεροξείδιο του υδρογόνου οξειδώνει τα χρωμογόνα υποστρώματα (ένα μείγμα φαινόλης και 4 αμινοαντιπυρίνης - 4ΑΑΡ) με το σχηματισμό ενός έγχρωμου προϊόντος. Η ένταση του χρώματος είναι ανάλογη με την περιεκτικότητα σε γλυκόζη.

2 Ν₂Ω₂ + φαινόλη + έγχρωμη ένωση 4ΑΑΠ + 4Η₂Ω

Πρόοδος εργασίας: 1 ml του διαλύματος εργασίας και 0,5 ml φωσφορικού ρυθμιστικού διαλύματος εισάγονται σε δύο σωλήνες. Στο πρώτο σωλήνα προστίθενται 0,02 ml ούρων και στη δεύτερη (βαθμονόμηση, πρότυπο διάλυμα γλυκόζης, 10 mmol / l) προστίθενται 0,02 ml του βαθμονομητή. Τα δείγματα αναμειγνύονται, επωάζονται για 15 λεπτά σε θερμοκρασία 37 ° C σε θερμοστάτη και η οπτική πυκνότητα μετράται με πειραματικό (D_op) και τη βαθμονόμηση (D_να) δείγματα έναντι του αντιδραστηρίου εργασίας σε μήκος κύματος 500-546 nm.

Η περιεκτικότητα σε γλυκόζη σε καθημερινά ούρα προσδιορίζεται σε mmol / ημέρα πολλαπλασιάζοντας το αποτέλεσμα που προκύπτει από τον όγκο των ούρων που συλλέγονται ανά ημέρα.

Σημείωση Όταν η περιεκτικότητα σε σάκχαρα στα ούρα πρέπει να αραιωθεί περισσότερο από 1%.

Επί του παρόντος, τα βιοχημικά εργαστήρια χρησιμοποιούν μια ενιαία ρητή μέθοδο για την ανάλυση ούρων για γλυκόζη χρησιμοποιώντας δοκιμασία γλυκόζης αντιδραστικής γλυκόζης ή χρησιμοποιώντας συνδυασμένες δοκιμαστικές ταινίες για pH, πρωτεΐνη, γλυκόζη, κετόνη και αίμα. Δοκιμαστικές ταινίες, βυθισμένες σε ένα δοχείο με ούρα για 1 δευτερόλεπτο. και να συγκρίνετε το χρώμα στην κλίμακα.

Ηπατίτιδα γιατρού

θεραπεία του ήπατος

Πρότυπη πρωτεΐνη στη μέθοδο της πυρογαλόλης των ούρων

Ένα υγιές άτομο παράγει 1,0-1,5 λίτρα ούρων την ημέρα. Μια περιεκτικότητα 8-10 mg / dl πρωτεΐνης σε αυτό είναι ένα φυσιολογικό φαινόμενο. Η ημερήσια πρόσληψη πρωτεΐνης στα ούρα 100-150 mg δεν πρέπει να προκαλεί υποψίες. Η σφαιρίνη, η βλεννοπρωτεΐνη και η λευκωματίνη αποτελούν το σύνολο των πρωτεϊνών στα ούρα. Μια μεγάλη εκροή λευκωματίνης υποδηλώνει παραβίαση της διαδικασίας διήθησης στα νεφρά και ονομάζεται πρωτεϊνουρία ή αλβουμινουρία.

Κάθε ουσία στα ούρα λαμβάνει έναν "υγιή" ρυθμό και εάν ο δείκτης πρωτεΐνης κυμαίνεται, αυτό μπορεί να υποδηλώνει παθολογία των νεφρών.

Η ανάλυση ούρων περιλαμβάνει τη χρήση είτε του πρώτου (πρωινού) τμήματος είτε του ημερήσιου δείγματος. Το τελευταίο είναι προτιμότερο να εκτιμηθεί το επίπεδο πρωτεϊνουρίας, δεδομένου ότι η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες έχει προφέρει τις καθημερινές διακυμάνσεις. Τα ούρα κατά τη διάρκεια της ημέρας συλλέγονται σε ένα δοχείο, μετρώντας τη συνολική ένταση. Για ένα εργαστήριο που διεξάγει ανάλυση πρωτεϊνών ούρων, επαρκές δείγμα (από 50 έως 100 ml) από αυτό το δοχείο είναι επαρκές · η υπόλοιπη ποσότητα δεν απαιτείται. Για περισσότερες πληροφορίες, πραγματοποιείται μια πρόσθετη δοκιμή στο Zimnitsky, η οποία δείχνει εάν οι δείκτες ούρων ανά ημέρα είναι φυσιολογικοί.

Επιστροφή στον πίνακα περιεχομένων

Η πρωτεΐνη στα ούρα είναι φυσιολογική σε έναν ενήλικα δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 0,033 g / l. Ταυτόχρονα, ο ημερήσιος ρυθμός δεν είναι μεγαλύτερος από 0,05 g / l. Για τις έγκυες γυναίκες, το ποσοστό των πρωτεϊνών στα καθημερινά ούρα είναι περισσότερο - 0,3 g / l. Και το πρωί τα ούρα είναι τα ίδια - 0,033 g / l. Τα πρότυπα πρωτεϊνών διαφέρουν στη γενική ανάλυση των ούρων και στα παιδιά: 0,036 g / l για το πρωινό τμήμα και 0,06 g / l ανά ημέρα. Τις περισσότερες φορές, τα εργαστήρια πραγματοποιούν ανάλυση χρησιμοποιώντας δύο μεθόδους, οι οποίες δείχνουν πόση ποσότητα πρωτεϊνών περιέχεται στα ούρα. Οι ανωτέρω κανονικές τιμές ισχύουν για την ανάλυση που πραγματοποιείται με σουλφοσαλικυλικό οξύ. Εάν χρησιμοποιήθηκε κόκκινη βαφή πυρογαλλολης, οι τιμές θα είναι τρεις φορές διαφορετικές.

Επιστροφή στον πίνακα περιεχομένων

Η αιτία της πρωτεΐνης στα ούρα μπορεί να είναι παθολογικές διεργασίες στα νεφρά:

• η διήθηση στα νεφρικά σπειράματα πηγαίνει λάθος.
• η απορρόφηση στους σωληνίσκους πρωτεϊνών είναι μειωμένη.
• Ορισμένες ασθένειες έχουν ισχυρό φορτίο στα νεφρά - όταν η πρωτεΐνη στο αίμα είναι αυξημένη, οι νεφροί απλά δεν έχουν χρόνο να τις φιλτράρουν.

Οι υπόλοιποι λόγοι θεωρούνται μη νεφρικές. Έτσι αναπτύσσεται η λειτουργική αλβουμινουρία. Η πρωτεΐνη στην ανάλυση των ούρων εμφανίζεται σε αλλεργικές αντιδράσεις, επιληψία, καρδιακή ανεπάρκεια, λευχαιμία, δηλητηρίαση, μυέλωμα, χημειοθεραπεία, συστηματικές ασθένειες. Πιο συχνά, αυτός ο δείκτης στις αναλύσεις των ασθενών θα είναι το πρώτο κουδούνι υπερτασικής ασθένειας.

Η αύξηση της πρωτεΐνης των ούρων μπορεί να οφείλεται σε παράγοντες μη παθολογικού χαρακτήρα, επομένως απαιτούνται πρόσθετες αναλύσεις. Επιστροφή στον πίνακα περιεχομένων

Οι ποσοτικές μέθοδοι για τον προσδιορισμό της πρωτεΐνης στα ούρα δίνουν σφάλματα, επομένως, συνιστάται η πραγματοποίηση αρκετών αναλύσεων και στη συνέχεια η χρήση του τύπου για τον υπολογισμό της σωστής τιμής. Η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες ούρων μετράται σε g / l ή mg / l. Αυτοί οι δείκτες πρωτεϊνών καθιστούν δυνατό τον προσδιορισμό του επιπέδου της πρωτεϊνουρίας, υποδηλώνουν έναν λόγο, αξιολογούν την πρόγνωση και καθορίζουν τη στρατηγική.

Επιστροφή στον πίνακα περιεχομένων

Για την πλήρη λειτουργία του σώματος απαιτείται συνεχής ανταλλαγή μεταξύ του αίματος και των ιστών. Είναι δυνατή μόνο εάν υπάρχει κάποια οσμωτική πίεση στα αιμοφόρα αγγεία. Οι πρωτεΐνες πλάσματος αίματος διατηρούν ακριβώς ένα τέτοιο επίπεδο πίεσης, όταν χαμηλού μοριακού βάρους ουσίες περνούν εύκολα από το μέσο με την υψηλή τους συγκέντρωση στο μέσο με τη χαμηλότερη συγκέντρωση. Η απώλεια πρωτεϊνικών μορίων οδηγεί στην απελευθέρωση αίματος από την κλίνη του στον ιστό, ο οποίος είναι γεμάτος με έντονο οίδημα. Αυτή είναι η εκδήλωση μέτριας και σοβαρής πρωτεϊνουρίας.

Τα αρχικά στάδια της αλβουμινουρίας είναι ασυμπτωματικά. Ο ασθενής δίνει προσοχή μόνο στις εκδηλώσεις της υποκείμενης νόσου, η οποία είναι η αιτία της πρωτεΐνης στα ούρα.

Η πρωτεϊνουρία ίχνους ονομάζεται αύξηση του επιπέδου πρωτεΐνης στα ούρα λόγω της χρήσης ορισμένων προϊόντων. Επιστροφή στον πίνακα περιεχομένων

Τα ούρα για ανάλυση συλλέγονται σε καθαρό, αποβουτυρωμένο δοχείο. Πριν από τη συλλογή της τουαλέτας εμφανίζεται το περίνεο, πρέπει να πλύνετε με σαπούνι και νερό. Συνιστάται στις γυναίκες να κλείνουν τον κόλπο με ένα κομμάτι βαμβακιού ή ένα ταμπόν, έτσι ώστε η κολπική απαλλαγή να μην επηρεάζει το αποτέλεσμα. Την παραμονή είναι καλύτερα να μην πίνετε αλκοόλ, μεταλλικό νερό, καφέ, πικάντικο, αλμυρό, και φαγητό που δίνει στα ούρα ένα χρώμα (βακκίνια, παντζάρια). Η έντονη σωματική άσκηση, το μακρύ περπάτημα, το άγχος, ο πυρετός και η εφίδρωση, η υπερβολική κατανάλωση πρωτεϊνικών τροφίμων ή φαρμάκων πριν από τη χορήγηση ούρων προκαλούν την εμφάνιση πρωτεΐνης στην ανάλυση ούρων ενός εντελώς υγιούς ατόμου. Αυτό το επιτρεπτό φαινόμενο ονομάζεται ίχνη πρωτεϊνουρία.

Επιστροφή στον πίνακα περιεχομένων

Νεφρική νόσο που οδηγεί σε απώλεια πρωτεϊνών:

• Αμυλοείδωση. Τα φυσιολογικά κύτταρα στα νεφρά αντικαθίστανται από αμυλοειδή (σύμπλεγμα πρωτεϊνών-σακχαριτών), το οποίο εμποδίζει το σώμα να λειτουργήσει κανονικά. Στο πρωτεϊνικό στάδιο, τα αμυλοειδή εναποτίθενται στους νεφρικούς ιστούς, καταστρέφοντας το νεφρόν και ως αποτέλεσμα το νεφρικό φίλτρο. Έτσι, η πρωτεΐνη παίρνει από το αίμα στα ούρα. Αυτό το στάδιο μπορεί να διαρκέσει περισσότερο από 10 χρόνια.
• Διαβητική νεφροπάθεια. Λόγω του ακατάλληλου μεταβολισμού των υδατανθράκων και των λιπιδίων, τα αιμοφόρα αγγεία, τα σπειράματα και οι σωληνώσεις στον νεφρό καταστρέφονται. Η πρωτεΐνη στα ούρα είναι το πρώτο σημάδι μιας προβλεπόμενης επιπλοκής του διαβήτη.
• Ασθένειες φλεγμονώδους γένεσης - νεφρίτιδα. Τις περισσότερες φορές, οι αλλοιώσεις επηρεάζουν τα αιμοφόρα αγγεία, το σπειραματόζωο και το πυελοκαλικανικό σύστημα, διακόπτοντας την κανονική πορεία του συστήματος διήθησης.
• Η γλολολενεονίτιδα στις περισσότερες περιπτώσεις έχει αυτοάνοση φύση. Ο ασθενής παραπονιέται για μείωση της ποσότητας ούρων, για πόνο στην πλάτη και για αύξηση πίεσης. Για τη θεραπεία της σπειραματονεφρίτιδας συνιστούμε δίαιτα, θεραπείες και φαρμακευτική θεραπεία.
• Πυελονεφρίτιδα. Στην οξεία περίοδο εμφανίζεται με συμπτώματα βακτηριακής μόλυνσης: ρίγη, ναυτία, κεφαλαλγία. Πρόκειται για μολυσματική ασθένεια.
• Πολυκυστική νεφρική νόσο.

Σε ένα υγιές σώμα, τα πρωτεϊνικά μόρια (και μάλλον μεγάλα σε μέγεθος) δεν είναι σε θέση να περάσουν από το σύστημα διήθησης των νεφρών. Ως εκ τούτου, η πρωτεΐνη στα ούρα δεν πρέπει να είναι. Ο δείκτης αυτός είναι ο ίδιος τόσο για τους άνδρες όσο και για τις γυναίκες. Εάν η ανάλυση υποδεικνύει πρωτεϊνουρία, είναι σημαντικό να συμβουλευτείτε γιατρό για λόγους. Ο ειδικός θα εκτιμήσει πόσο αυξημένο είναι το επίπεδο πρωτεΐνης, εάν υπάρχει παθολογία ταυτόχρονα, πώς μπορεί να αποκατασταθεί η φυσιολογική λειτουργία του σώματος. Σύμφωνα με στατιστικά στοιχεία, οι γυναίκες έχουν υψηλότερο κίνδυνο ουρογεννητικής νόσου από τους άνδρες.

Αρχή της μεθόδου με βάση την πήξη της πρωτεΐνης στα ούρα παρουσία νιτρικού (ή 20% διαλύματος σουλφοσαλικυλικού) οξέος.

Πρόοδος εργασίας: σε 5 σταγόνες ούρων προσθέστε 1-2 σταγόνες νιτρικού (ή σουλφοσαλικυλικού) οξέος. Παρουσία πρωτεΐνης στα ούρα εμφανίζεται θολότητα.

Πίνακας Ανίχνευση παθολογικών συστατικών των ούρων.

Σημείωση: παρουσία γλυκόζης και πρωτεΐνης στα εξετασθέντα ούρα, προσδιορίζεται το ποσοτικό τους περιεχόμενο.

Αρχή της μεθόδου: Όταν η πρωτεΐνη αλληλεπιδρά με το κόκκινο πυρογαλλόλης και το μολυβδαινικό νάτριο, σχηματίζεται ένα χρωματισμένο σύμπλεγμα, η ένταση χρώματος, η οποία είναι ανάλογη με τη συγκέντρωση πρωτεΐνης στο δείγμα.

Αντιδραστήρια: Αντιδραστήριο εργασίας - ερυθρό διάλυμα πυρογαλλολης σε ρυθμιστικό ηλεκτρικού οξέος, διάλυμα πρωτεϊνών βαθμονόμησης με συγκέντρωση 0,50 g / l

Τα δείγματα αναμιγνύονται και κρατούνται για 10 λεπτά. σε θερμοκρασία δωματίου (18-25 ° C). Μετρήστε την οπτική πυκνότητα του πειραματικού δείγματος (Dop) και βαθμονόμησης (Dk) έναντι του δείγματος ελέγχου σε λ = 598 (578-610) nm. Ο χρωματισμός είναι σταθερός για 1 ώρα.

Υπολογισμός: η συγκέντρωση πρωτεΐνης στα ούρα (C) g / l υπολογίζεται από τον τύπο:

όπου: Dop = Dk = C = g / l.

Κανονικές τιμές: έως 0.094 g / l, (0.141 g / ημέρα)

Αρχή της μεθόδου: Όταν η D-γλυκόζη οξειδώνεται με ατμοσφαιρικό οξυγόνο υπό την επίδραση της οξειδάσης γλυκόζης, σχηματίζεται μια ισομοριακή ποσότητα υπεροξειδίου του υδρογόνου. Υπό τη δράση της υπεροξειδάσης, το υπεροξείδιο του υδρογόνου οξειδώνει τα χρωμογόνα υποστρώματα (ένα μείγμα φαινόλης και 4 αμινοαντιπυρίνης - 4ΑΑΡ) με το σχηματισμό ενός έγχρωμου προϊόντος. Η ένταση του χρώματος είναι ανάλογη με την περιεκτικότητα σε γλυκόζη.

Γλυκόζη + Ο2 + Η2Ο γλυκονολακτόνη + Η2Ο2

2Η2Ο2 + φαινόλη + έγχρωμη ένωση 4ΑΑΡ + 4Η2Ο

Πρόοδος εργασίας: 1 ml του διαλύματος εργασίας και 0,5 ml φωσφορικού ρυθμιστικού διαλύματος εισάγονται σε δύο σωλήνες. Στο πρώτο σωλήνα προστίθενται 0,02 ml ούρων και στη δεύτερη (βαθμονόμηση, πρότυπο διάλυμα γλυκόζης, 10 mmol / l) προστίθενται 0,02 ml του βαθμονομητή. Τα δείγματα αναμιγνύονται, επωάζονται για 15 λεπτά σε θερμοκρασία 37 ° C σε θερμοστάτη και μετράται η οπτική πυκνότητα των πειραματικών (Dop) και βαθμονομημένων (Dk) δειγμάτων έναντι του αντιδραστηρίου εργασίας σε μήκος κύματος 500-546 nm.

Υπολογισμός: C = Dop / Dk  10 mmol / l Dop = Dk =

Η περιεκτικότητα σε γλυκόζη σε καθημερινά ούρα προσδιορίζεται σε mmol / ημέρα πολλαπλασιάζοντας το αποτέλεσμα που προκύπτει από τον όγκο των ούρων που συλλέγονται ανά ημέρα.

Σημείωση Όταν η περιεκτικότητα σε σάκχαρα στα ούρα πρέπει να αραιωθεί περισσότερο από 1%.

Επί του παρόντος, τα βιοχημικά εργαστήρια χρησιμοποιούν μια ενιαία ρητή μέθοδο για την ανάλυση ούρων για γλυκόζη χρησιμοποιώντας δοκιμασία γλυκόζης αντιδραστικής γλυκόζης ή χρησιμοποιώντας συνδυασμένες δοκιμαστικές ταινίες για pH, πρωτεΐνη, γλυκόζη, κετόνη και αίμα. Δοκιμαστικές ταινίες, βυθισμένες σε ένα δοχείο με ούρα για 1 δευτερόλεπτο. και να συγκρίνετε το χρώμα στην κλίμακα.

Προσδιορισμός της πρωτεΐνης χρησιμοποιώντας δείκτη κόκκινη πυρογαλλολη

Η αρχή της μεθόδου βασίζεται στη φωτομετρική μέτρηση της οπτικής πυκνότητας ενός διαλύματος ενός έγχρωμου συμπλόκου που σχηματίζεται από την αλληλεπίδραση μορίων πρωτεΐνης με μόρια του συμπλόκου κόκκινου χρωστικού πυρογαλλόλης και μολυβδαινικού νατρίου (σύμπλοκο Pyrogallol Red-Molybdate) σε όξινο περιβάλλον. Η ένταση χρώματος του διαλύματος είναι ανάλογη με την περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη στο υπό μελέτη υλικό. Η παρουσία απορρυπαντικών στο αντιδραστήριο παρέχει έναν ισοδύναμο ορισμό πρωτεϊνών διαφορετικής φύσης και δομής.

Αντιδραστήρια. 1) διάλυμα 1,5 mmol / l ερυθρο πυρογαλλολης (PGA): 60 mg PGA διαλύονται σε 100 ml μεθανόλης. Φυλάσσεται σε θερμοκρασία 0-5 ° C. 2) Διάλυμα ρυθμιστικού διαλύματος ηλεκτρικού 50 mmol / 1 ρΗ 2,5: 5,9 g ηλεκτρικού οξέος (HOOC-CH2-CH2-COOH). 0,14 g οξαλικού νατρίου (Na2C2O4) και 0,5 g βενζοϊκού νατρίου (C6H5COONa) διαλύονται σε 900 ml αποσταγμένου νερού. 3) 10 mmol / l διάλυμα ένυδρου κρυστάλλου μολυβδικού νατρίου (Na2MoO4 × 2H2O): 240 mg μολυβδικού νατρίου διαλύονται σε 100 ml αποσταγμένου νερού. 4) Αντιδραστήριο εργασίας: σε 900 ml ρυθμιστικού διαλύματος ηλεκτρικού άλατος προστίθενται 40 ml διαλύματος PHC και 4 ml διαλύματος μολυβδαινικού νατρίου. Το ρΗ του διαλύματος ρυθμίζεται στο 2,5 με διάλυμα υδροχλωρικού οξέος (HCl) 0,1 mol / l και ο όγκος του ρυθμίζεται σε 1 λίτρο. Το αντιδραστήριο σε αυτή τη μορφή είναι έτοιμο για χρήση και είναι σταθερό όταν φυλάσσεται σε σκοτεινό μέρος και σε θερμοκρασία 2-25 ° C για 6 μήνες. 5) 0,5 g / l πρότυπου διαλύματος αλβουμίνης.

Η πορεία του προσδιορισμού. Στο πρώτο δοκιμαστικό σωλήνα εισάγονται 0,05 ml από τα ούρα που μελετήθηκαν, προστίθενται 0,05 ml πρότυπου διαλύματος λευκωματίνης στο δεύτερο δοκιμαστικό σωλήνα και 0,05 ml αποσταγμένου νερού στον τρίτο δοκιμαστικό σωλήνα (δείγμα ελέγχου), στη συνέχεια προστίθενται 3 ml αντιδραστηρίου εργασίας σε αυτούς τους δοκιμαστικούς σωλήνες. Τα περιεχόμενα των σωλήνων αναμιγνύονται και μετά από 10 λεπτά, το δείγμα και το πρότυπο φωτομετρείται έναντι ενός δείγματος ελέγχου σε μήκος κύματος 596 nm σε κυψελίδα με μήκος οπτικής διαδρομής 10 mm.

Ο υπολογισμός της συγκέντρωσης πρωτεΐνης στο αναλυθέν δείγμα ούρων πραγματοποιείται σύμφωνα με τον τύπο:

C = 0,5 × Απρ / Ασ,

όπου C είναι η συγκέντρωση πρωτεΐνης στο αναλυθέν δείγμα ούρων, g / l. Απρ και Αστ - εξαφάνιση του ελεγχόμενου δείγματος ούρων και πρότυπου διαλύματος λευκωματίνης, g / l. 0,5 - συγκέντρωση πρότυπου διαλύματος αλβουμίνης, g / l.

• το χρώμα του διαλύματος (σύμπλοκο χρώματος) είναι σταθερό για μία ώρα.
• η άμεση αναλογική σχέση μεταξύ της συγκέντρωσης πρωτεΐνης στο δείγμα και της απορρόφησης του διαλύματος εξαρτάται από τον τύπο του φωτομέτρου.
• όταν η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες στα ούρα είναι μεγαλύτερη από 3 g / l, το δείγμα αραιώνεται με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου (9 g / l) και ο προσδιορισμός επαναλαμβάνεται. Ο βαθμός αραίωσης λαμβάνεται υπόψη κατά τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης πρωτεΐνης.

• Προσδιορισμός της πρωτεΐνης των ούρων
• Ενιαία Δοκιμή Σουλφοσαλικυλικού Οξέος
• Η μέθοδος Unified Brandberg - Roberts - Stolnikov
• Προσδιορισμός της ποσότητας πρωτεΐνης στα ούρα με αντίδραση με σουλφοσαλικυλικό οξύ
• Μέθοδος Biuret
• Ανίχνευση στα ούρα της πρωτεΐνης Bens - Jones

Η πρωτεϊνουρία είναι ένα φαινόμενο στο οποίο ανιχνεύεται πρωτεΐνη στα ούρα, γεγονός που υποδεικνύει τη δυνατότητα νεφρικής βλάβης, χρησιμεύει ως παράγοντας στην ανάπτυξη καρδιακών παθήσεων, αιμοφόρων αγγείων, λεμφικών αγγείων.

Η ανίχνευση πρωτεΐνης στα ούρα δεν υποδεικνύει πάντα μια ασθένεια. Ένα παρόμοιο φαινόμενο είναι χαρακτηριστικό ακόμα και για απολύτως υγιείς ανθρώπους, των οποίων η πρωτεΐνη των ούρων μπορεί να ανιχνευθεί. Η υποθερμία, η σωματική άσκηση, η κατανάλωση πρωτεϊνικών τροφών οδηγεί στην εμφάνιση πρωτεΐνης στα ούρα, η οποία εξαφανίζεται χωρίς καμία θεραπεία.

Κατά τη στιγμή της ανίχνευσης, το 17% των πρακτικά υγιεινών ατόμων προσδιορίζει πρωτεΐνες, αλλά μόνο το 2% αυτού του αριθμού ανθρώπων παρουσιάζει ένα θετικό αποτέλεσμα εξέτασης ως σημάδι νεφρικής νόσου.

Τα μόρια πρωτεΐνης δεν πρέπει να εισέρχονται στο αίμα. Είναι ζωτικής σημασίας για το σώμα - είναι ένα δομικό υλικό για τα κύτταρα, συμμετέχουν σε αντιδράσεις ως συνένζυμα, ορμόνες, αντισώματα. Σε άνδρες και γυναίκες, ο ρυθμός είναι η πλήρης απουσία πρωτεΐνης στα ούρα.

Η λειτουργία της πρόληψης της απώλειας πρωτεϊνικών μορίων από το σώμα πραγματοποιείται από τα νεφρά.

Δύο συστήματα νεφρών εμπλέκονται στο φιλτράρισμα ούρων:

1. glomeruli - μην αφήνετε σε μεγάλα μόρια, αλλά δεν διατηρείτε αλβουμίνη, σφαιρίνες - ένα μικρό κλάσμα πρωτεϊνικών μορίων?
2. νεφρικά σωληνάρια - προσρόφηση πρωτεϊνών φιλτραρισμένων σπειραμάτων, επιστροφή πίσω στο κυκλοφορικό σύστημα.

Αλβουμίνη (περίπου 49%), βλεννοπρωτεΐνες, σφαιρίνες βρίσκονται στα ούρα, από τις οποίες το ποσοστό των ανοσοσφαιρινών αντιπροσωπεύει περίπου το 20%.

Γλυπίνες - πρωτεΐνες ορού γάλακτος σε υψηλό μοριακό βάρος, οι οποίες παράγονται στο ανοσοποιητικό σύστημα και στο ήπαρ. Τα περισσότερα από αυτά συντίθενται από το ανοσοποιητικό σύστημα, αναφέρονται σε ανοσοσφαιρίνες ή αντισώματα.

Τα λευκωματίνες είναι ένα κλάσμα πρωτεϊνών που εμφανίζονται πρώτα στα ούρα ακόμη και με μικρές βλάβες στα νεφρά. Υπάρχει μια ορισμένη ποσότητα λευκωματίνης σε υγιή ούρα, αλλά είναι τόσο ασήμαντη ώστε δεν μπορεί να ανιχνευθεί με εργαστηριακή διάγνωση.

Το κατώτατο όριο που μπορεί να ανιχνευθεί με εργαστηριακή διάγνωση είναι 0,033 g / l. Αν χάσετε περισσότερες από 150 mg πρωτεΐνης την ημέρα, μιλάμε για πρωτεϊνουρία.

Βασικά δεδομένα πρωτεΐνης ούρων

Η ασθένεια με ήπια πρωτεϊνουρία είναι ασυμπτωματική. Οπτικά, τα ούρα χωρίς πρωτεΐνη δεν μπορούν να διακριθούν από τα ούρα, στα οποία υπάρχει μικρή ποσότητα πρωτεΐνης. Κάπως αφρώδη ούρα γίνεται ήδη με υψηλό βαθμό πρωτεϊνουρίας.

Είναι δυνατόν να υποθέσουμε μια ενεργή απέκκριση πρωτεΐνης στα ούρα από την εμφάνιση του ασθενούς μόνο με μέτριο ή σοβαρό βαθμό της νόσου λόγω εμφάνισης οίδημα των άκρων, του προσώπου, της κοιλιάς.

Στα αρχικά στάδια της ασθένειας, τα ακόλουθα μπορεί να είναι έμμεσα σημάδια πρωτεϊνουρίας:

• αποχρωματισμός ούρων.
• αυξανόμενη αδυναμία.
• έλλειψη όρεξης.
• ναυτία, έμετος.
• οστικός πόνος;
• υπνηλία, ζάλη
• αυξημένη θερμοκρασία.

Η εμφάνιση τέτοιων σημείων δεν μπορεί να αγνοηθεί, ειδικά κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης. Αυτό μπορεί να σημαίνει ελαφρά απόκλιση από τον κανόνα και μπορεί να είναι σύμπτωμα ανάπτυξης προεκλαμψίας, προεκλαμψίας.

Η ποσοτικοποίηση της απώλειας πρωτεΐνης δεν είναι εύκολη υπόθεση, προκειμένου να επιτευχθεί μια πληρέστερη εικόνα της κατάστασης του ασθενούς, χρησιμοποιούνται διάφορες εργαστηριακές εξετάσεις.

Οι δυσκολίες στην επιλογή μιας μεθόδου για την ανίχνευση περίσσειας πρωτεΐνης στα ούρα εξηγούνται από τα εξής:

• χαμηλή συγκέντρωση πρωτεϊνών, για την οποία η αναγνώριση απαιτεί μέσα υψηλής ακρίβειας.
• σύνθεση των ούρων, περιπλέκει το έργο, καθώς περιέχει ουσίες που διαστρεβλώνουν το αποτέλεσμα.

Οι μεγαλύτερες πληροφορίες παρέχονται από την ανάλυση του πρώτου πρωινού μέρους των ούρων, το οποίο συλλέγεται μετά το ξύπνημα.

Την παραμονή της ανάλυσης, πρέπει να πληρούνται οι ακόλουθες προϋποθέσεις:

• Μην τρώτε πικάντικα, τηγανητά, πρωτεϊνικά τρόφιμα, αλκοόλ?
• να αποκλειστεί το διουρητικό για 48 ώρες.
• περιορίζουν τη φυσική δραστηριότητα.
• ακολουθήστε προσεκτικά τους κανόνες της προσωπικής υγιεινής.

Τα πρωινά ούρα είναι το πιο ενημερωτικό, καθώς είναι μακροχρόνιο στην ουροδόχο κύστη, λιγότερο εξαρτώμενο από την πρόσληψη τροφής.

Η ποσότητα της πρωτεΐνης στα ούρα μπορεί να αναλυθεί με τυχαία δόση, η οποία λαμβάνεται ανά πάσα στιγμή, αλλά αυτή η ανάλυση είναι λιγότερο ενημερωτική, τόσο μεγαλύτερη είναι η πιθανότητα σφάλματος.

Για να ποσοτικοποιηθεί η καθημερινή απώλεια πρωτεΐνης, γίνεται μια ανάλυση των συνολικών ημερήσιων ούρων. Για να γίνει αυτό, μέσα σε 24 ώρες συλλέγονται σε ειδικό πλαστικό δοχείο όλα τα ούρα που διατίθενται για την ημέρα. Μπορείτε να ξεκινήσετε τη συλλογή ανά πάσα στιγμή. Η κύρια κατάσταση - ακριβώς την ημέρα της συλλογής.

Ο ποιοτικός ορισμός της πρωτεϊνουρίας βασίζεται στη μετουσίωση της πρωτεΐνης με φυσικούς ή χημικούς παράγοντες. Οι ποιοτικές μέθοδοι αφορούν τη διαλογή, η οποία επιτρέπει να διαπιστωθεί η παρουσία πρωτεΐνης στα ούρα, χωρίς όμως να δίνεται η ευκαιρία να εκτιμηθεί με ακρίβεια ο βαθμός πρωτεϊνουρίας.

Χρησιμοποιημένα δείγματα:

• με βρασμό.
• σουλφοσαλικυλικό οξύ.
• νιτρικό οξύ, αντιδραστήριο Larionic στο δείγμα δακτυλίου Heller.

Λαμβάνεται ένα δείγμα με σουλφοσαλικυλικό οξύ συγκρίνοντας ένα δείγμα ούρων ελέγχου με ένα έμπειρο, στο οποίο προστίθενται 7-8 σταγόνες 20% σουλφοσαλικυλικού οξέος στα ούρα. Το συμπέρασμα για την παρουσία της πρωτεΐνης γίνεται σύμφωνα με την ένταση της θολερότητας που εμφανίζεται στον δοκιμαστικό σωλήνα κατά τη διάρκεια της αντίδρασης.

Συνηθέστερα χρησιμοποιούμενη δοκιμασία Geller χρησιμοποιώντας 50% νιτρικό οξύ. Η ευαισθησία της μεθόδου είναι 0,033 g / l. Με μια τέτοια συγκέντρωση πρωτεΐνης σε δοκιμαστικό σωλήνα με δείγμα ούρων και αντιδραστήριο για 2-3 λεπτά μετά την έναρξη του πειράματος, εμφανίζεται ένας λευκός δακτύλιος νήματος, ο σχηματισμός του οποίου υποδηλώνει την παρουσία πρωτεΐνης.

Οι ημι-ποσοτικές μέθοδοι περιλαμβάνουν:

• μέθοδος προσδιορισμού της πρωτεΐνης στις δοκιμαστικές ταινίες ούρων.
• Brandberg-Roberts-Stolnikov μέθοδο.

Η μέθοδος προσδιορισμού σύμφωνα με τη μέθοδο Brandberg-Roberts-Stolnikov βασίζεται στη μέθοδο του δακτυλίου Geller, αλλά επιτρέπει την ακριβέστερη εκτίμηση της ποσότητας πρωτεΐνης. Όταν εκτελείται μια δοκιμή χρησιμοποιώντας αυτή την τεχνική, αρκετές αραιώσεις ούρων επιτυγχάνουν την εμφάνιση ενός σπειροειδούς πρωτεϊνικού δακτυλίου στο χρονικό διάστημα μεταξύ 2-3 λεπτών από την έναρξη της δοκιμής.

Στην πράξη, η μέθοδος της ταινίας δοκιμής χρησιμοποιείται με την εφαρμοζόμενη βαφή βρωμοφαινόλης χρώματος ως δείκτη. Το μειονέκτημα των δοκιμαστικών λωρίδων είναι η εκλεκτική ευαισθησία στην αλβουμίνη, η οποία οδηγεί σε παραμόρφωση του αποτελέσματος στην περίπτωση αύξησης της συγκέντρωσης ούρων σε σφαιρίνες ή άλλες πρωτεΐνες.

Τα μειονεκτήματα της μεθόδου είναι επίσης σχετικά χαμηλή ευαισθησία της δοκιμής στην πρωτεΐνη. Οι δοκιμαστικές ταινίες αρχίζουν να ανταποκρίνονται στην παρουσία πρωτεΐνης στα ούρα σε συγκέντρωση πρωτεΐνης μεγαλύτερη από 0,15 g / l.

Οι ποσοτικές μέθοδοι αξιολόγησης μπορούν να διαχωριστούν υπό όρους:

Οι μέθοδοι βασίζονται στην ιδιότητα των πρωτεϊνών για να μειώσουν τη διαλυτότητα υπό τη δράση ενός συνδετικού παράγοντα με το σχηματισμό μιας ελάχιστα διαλυτής ένωσης.

Παράγοντες που προκαλούν δέσμευση πρωτεϊνών, μπορεί να είναι:

• σουλφοσαλικυλικό οξύ.
• τριχλωροοξικό οξύ.
• χλωριούχου βενζαιθονίου.

Στα αποτελέσματα των δοκιμών, εξάγονται συμπεράσματα με βάση τον βαθμό εξασθένησης της ροής φωτός στο δείγμα με εναιώρημα σε σύγκριση με τον έλεγχο. Τα αποτελέσματα αυτής της μεθόδου δεν μπορούν πάντοτε να αποδοθούν σε αξιόπιστα λόγω των διαφορών στις συνθήκες: της ταχύτητας ανάμιξης των αντιδραστηρίων, της θερμοκρασίας, της οξύτητας του μέσου.

Δεν μπορεί να ληφθεί η επίδραση στην αξιολόγηση της πρόσληψης φαρμάκων την προηγούμενη ημέρα πριν από τη διεξαγωγή δοκιμών που χρησιμοποιούν αυτές τις μεθόδους:

• αντιβιοτικά ·
• σουλφοναμίδια.
• φάρμακα που περιέχουν ιώδιο.

Η μέθοδος αναφέρεται στο διαθέσιμο κόστος, το οποίο επιτρέπει την ευρεία χρήση του για έλεγχο. Αλλά πιο ακριβή αποτελέσματα μπορούν να ληφθούν χρησιμοποιώντας ακριβότερες χρωματομετρικές τεχνικές.

Οι ευαίσθητες μέθοδοι που καθορίζουν με ακρίβεια τη συγκέντρωση πρωτεΐνης στα ούρα περιλαμβάνουν χρωματομετρικές μεθόδους.

Μπορείτε να το κάνετε με μεγάλη ακρίβεια:

• αντίδραση διουρίας ·
• τεχνική Lowry;
• Τεχνικές χρωματισμού που χρησιμοποιούν χρωστικές ουσίες που σχηματίζουν σύμπλοκα με πρωτεΐνες ούρων που διαφέρουν οπτικά από το δείγμα.

Χρωματομετρικές μέθοδοι για την ανίχνευση πρωτεΐνης στα ούρα

Η μέθοδος αναφέρεται σε ένα αξιόπιστο, εξαιρετικά ευαίσθητο, που επιτρέπει τον προσδιορισμό στην αλβουμίνη ούρων, των σφαιρινών, των παραπρωτεϊνών. Χρησιμοποιείται ως η κύρια μέθοδος για τη διευκρίνιση των αμφιλεγόμενων αποτελεσμάτων των εξετάσεων, καθώς και της καθημερινής πρωτεΐνης ούρων σε ασθενείς με νεφρολογικά τμήματα νοσοκομείων.

Ακόμα πιο ακριβή αποτελέσματα μπορούν να επιτευχθούν με τη μέθοδο Lowry, η οποία βασίζεται στην αντίδραση διουρίας, καθώς και την αντίδραση Folin, η οποία αναγνωρίζει την τρυπτοφάνη και τυροσίνη σε πρωτεϊνικά μόρια.

Για να εξαλειφθούν τυχόν λάθη, το δείγμα ούρων καθαρίζεται με αιμοκάθαρση από αμινοξέα, ουρικό οξύ. Σφάλματα είναι πιθανά όταν χρησιμοποιούνται σαλικυλικά, τετρακυκλίνες, χλωροπρομαζίνη.

Η πιο ακριβής μέθοδος για τον προσδιορισμό μιας πρωτεΐνης βασίζεται στην ιδιότητά της να δεσμεύεται με τις βαφές που χρησιμοποιούνται:

• ponceau;
• Coomassie λαμπρό μπλε?
• πυρογαλικό κόκκινο.

Κατά τη διάρκεια της ημέρας, η ποσότητα της πρωτεΐνης που εκκρίνεται στα ούρα ποικίλλει. Για την πιο αντικειμενική αξιολόγηση της απώλειας πρωτεΐνης στα ούρα, εισάγετε την έννοια της καθημερινής πρωτεΐνης στα ούρα. Η τιμή αυτή μετράται σε g / ημέρα.

Για μια γρήγορη εκτίμηση της ημερήσιας πρωτεΐνης στα ούρα, η ποσότητα πρωτεΐνης και κρεατινίνης προσδιορίζεται σε μία μερίδα ούρων, τότε η αναλογία πρωτεΐνης / κρεατινίνης λαμβάνεται από την απώλεια πρωτείνης ανά ημέρα με την αναλογία.

Η μέθοδος βασίζεται στο γεγονός ότι ο ρυθμός έκκρισης κρεατινίνης στο ουροποιητικό είναι σταθερός, δεν αλλάζει κατά τη διάρκεια της ημέρας. Σε ένα υγιές άτομο, η φυσιολογική αναλογία πρωτεΐνης: κρεατινίνης στα ούρα είναι 0,2.

Αυτή η μέθοδος εξαλείφει πιθανά σφάλματα που μπορεί να προκύψουν κατά τη συλλογή καθημερινών ούρων.

Ποιοτικές δοκιμές πιο συχνά από τις ποσοτικές δοκιμές δίνουν ψευδώς θετικά ή ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα. Λάθη προκύπτουν σε σχέση με τα φάρμακα, τις διατροφικές συνήθειες, τη σωματική δραστηριότητα την παραμονή της ανάλυσης.

Η αποκωδικοποίηση αυτής της ποιοτικής δοκιμής δίδεται με οπτική εκτίμηση της θολότητας στον δοκιμαστικό σωλήνα σε σύγκριση με το αποτέλεσμα της δοκιμής με τον έλεγχο:

1. η ασθενής θετική αντίδραση υπολογίζεται ως +.
2. θετικό ++;
3. απότομα θετικό +++.

Η δοκιμή δακτυλίου του Geller εκτιμά με μεγαλύτερη ακρίβεια την παρουσία πρωτεΐνης στα ούρα, αλλά δεν επιτρέπει ποσοτικοποίηση της πρωτεΐνης στα ούρα. Όπως και με τη δοκιμασία σουλφοσαλικυλικού οξέος, η δοκιμή Geller δίνει μόνο μια κατά προσέγγιση ιδέα για την περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες ούρων.

Η μέθοδος επιτρέπει την εκτίμηση του βαθμού πρωτεϊνουρίας ποσοτικά, αλλά πολύ χρονοβόρα, ανακριβής, καθώς με την ισχυρή αραίωση μειώνεται η ακρίβεια της αξιολόγησης.

Για να υπολογίσετε την πρωτεΐνη, πρέπει να πολλαπλασιάσετε τον βαθμό αραιώσεως των ούρων κατά 0, 033 g / l:

Η δοκιμή δεν απαιτεί ειδικές συνθήκες, αυτή η διαδικασία είναι εύκολο να γίνει στο σπίτι. Για να γίνει αυτό, πρέπει να χαμηλώσετε τη δοκιμαστική ταινία στα ούρα για 2 λεπτά.

Τα αποτελέσματα θα εκφράζονται με τον αριθμό των πλεονάξεων στη λωρίδα, η αποκωδικοποίηση των οποίων περιέχεται στον πίνακα:

1. Τα αποτελέσματα των δοκιμών που αντιστοιχούν σε τιμές μέχρι 30 mg / 100 ml αντιστοιχούν σε φυσιολογική πρωτεϊνουρία.
2. Οι τιμές στις δοκιμαστικές ταινίες 1+ και 2 ++ σημαίνουν σημαντική πρωτεϊνουρία.
3. Οι τιμές των 3 +++, 4 ++++ σημειώνονται με παθολογική πρωτεϊνουρία που προκαλείται από ασθένειες των νεφρών.

Οι ταινίες δοκιμής μπορούν να καθορίσουν μόνο την αυξημένη πρωτεΐνη στα ούρα. Δεν χρησιμοποιούνται για ακριβή διάγνωση, και ακόμη περισσότερο δεν μπορούν να πουν τι σημαίνει.

Μην επιτρέπετε στις δοκιμαστικές ταινίες να αξιολογούν επαρκώς την ποσότητα πρωτεΐνης στα ούρα σε έγκυες γυναίκες. Μια πιο αξιόπιστη μέθοδος αξιολόγησης είναι ο προσδιορισμός της πρωτεΐνης στα καθημερινά ούρα.

Προσδιορισμός της πρωτεΐνης ούρων με δοκιμαστικές ταινίες:

Η καθημερινή πρωτεΐνη στα ούρα είναι μια ακριβέστερη διάγνωση της εκτίμησης της λειτουργικής κατάστασης των νεφρών. Για αυτό πρέπει να συλλέξετε όλα τα ούρα που εκκρίνονται από τα νεφρά ημερησίως.

Η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνες στα ούρα μπορεί να βρεθεί με την αναλογία πρωτεΐνης: κρεατινίνη, τα δεδομένα φαίνονται στον πίνακα:

Ισχύουσες τιμές για την αναλογία πρωτεΐνης / κρεατινίνης είναι τα δεδομένα στον πίνακα:

Με την απώλεια περισσότερων από 3,5 g πρωτεΐνης την ημέρα, η κατάσταση ονομάζεται μαζική πρωτεϊνουρία.

Αν υπάρχει μεγάλη ποσότητα πρωτεϊνών στα ούρα, απαιτείται επανέλεγχος μετά από 1 μήνα, στη συνέχεια μετά από 3 μήνες, σύμφωνα με τα αποτελέσματα, τα οποία καθορίζουν τους λόγους υπέρβασης του κανόνα.

Αιτίες αυξημένης πρωτεΐνης στα ούρα είναι η αυξημένη παραγωγή του στο σώμα και η παραβίαση των νεφρών, διακρίνεται η πρωτεϊνουρία:

• φυσιολογικές - μικρές αποκλίσεις από τον κανόνα προκαλούνται από φυσιολογικές διεργασίες, επιλύονται αυθόρμητα.
• οι παθολογικές αλλαγές προκαλούνται ως αποτέλεσμα της παθολογικής διαδικασίας στους νεφρούς ή σε άλλα όργανα του σώματος, χωρίς να προχωρήσει η θεραπεία.

Μία ελαφρά αύξηση της πρωτεΐνης μπορεί να παρατηρηθεί με άφθονη διατροφή πρωτεϊνών, μηχανικά εγκαύματα, τραυματισμούς, συνοδευόμενη από αυξημένη παραγωγή ανοσοσφαιρινών.

Μια ήπια πρωτεϊνουρία μπορεί να προκληθεί από σωματική άσκηση, ψυχο-συναισθηματικό στρες ή λήψη ορισμένων φαρμάκων.

Η φυσιολογική πρωτεϊνουρία είναι μια αύξηση της πρωτεΐνης ούρων στα παιδιά τις πρώτες ημέρες μετά τη γέννηση. Αλλά μετά από μια εβδομάδα ζωής, η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη στα ούρα ενός παιδιού θεωρείται ως απόκλιση από τον κανόνα και υποδεικνύει μια αναπτυσσόμενη παθολογία.

Η ασθένεια των νεφρών, οι μολυσματικές ασθένειες επίσης συνοδεύονται μερικές φορές από την εμφάνιση πρωτεΐνης στα ούρα.

Τέτοιες καταστάσεις συνήθως αντιστοιχούν σε ήπιο βαθμό πρωτεϊνουρίας, είναι μεταβατικά φαινόμενα, περνούν γρήγορα από μόνοι τους, χωρίς να χρειάζονται ειδική θεραπεία.

Πιο σοβαρές καταστάσεις, σοβαρή πρωτεϊνουρία παρατηρείται στην περίπτωση:

• σπειραματονεφρίτιδα.
• διαβήτη ·
• καρδιακές παθήσεις
• καρκίνο της ουροδόχου κύστης
• πολλαπλό μυέλωμα.
• λοίμωξη, φαρμακευτική βλάβη, πολυκυστική νεφρική νόσο,
• υψηλή αρτηριακή πίεση.
• συστηματικός ερυθηματώδης λύκος.
• Σύνδρομο Goodpasture.

Εντερική απόφραξη, καρδιακή ανεπάρκεια και υπερθυρεοειδισμός μπορεί να προκαλέσει ίχνη πρωτεΐνης στα ούρα.

Οι ποικιλίες πρωτεϊνουρίας ταξινομούνται με διάφορους τρόπους. Για μια ποιοτική αξιολόγηση των πρωτεϊνών, μπορεί κανείς να χρησιμοποιήσει την ταξινόμηση Yaroshevsky.

Σύμφωνα με τη συστηματική του Yaroshevsky, που δημιουργήθηκε το 1971, η πρωτεϊνουρία διακρίνεται:

1. νεφρική - η οποία περιλαμβάνει την παραβίαση της σπειραματικής διήθησης, την απελευθέρωση της πρωτεΐνης των σωληναρίων, την έλλειψη επαναπροσρόφησης πρωτεϊνών στους σωληνίσκους,
2. προρενική - εμφανίζεται εκτός των νεφρών, απέκκριση αιμοσφαιρίνης, πρωτεΐνες που εμφανίζονται σε περίσσεια στο αίμα ως αποτέλεσμα του πολλαπλού μυελώματος.
3. Postrenal - εμφανίζεται στο σημείο της ουροφόρου οδού μετά από τα νεφρά, η απέκκριση της πρωτεΐνης στην καταστροφή των ουροφόρων οργάνων.

Για μια ποσοτική εκτίμηση του τι συμβαίνει, απομονώνονται υπό όρους πρωτεϊνουρία. Πρέπει να θυμόμαστε ότι μπορούν εύκολα να περάσουν σε ένα βαρύτερο χωρίς θεραπεία.

Το πιο σοβαρό στάδιο της πρωτεϊνουρίας αναπτύσσεται με την απώλεια περισσότερων από 3 g πρωτεΐνης την ημέρα. Η απώλεια πρωτεΐνης από 30 mg έως 300 mg ανά ημέρα αντιστοιχεί στο μέτριο στάδιο ή στη μικρολευγουρία. Έως 30 mg πρωτεΐνης σε καθημερινά ούρα σημαίνει ήπια πρωτεϊνουρία.

Πρωτεϊνικό πρότυπο στα ούρα πόσο;

Η κανονική πρωτεΐνη στα ούρα είναι σχεδόν απουσία (λιγότερο από 0,002 g / l). Εντούτοις, σε μερικές περιπτώσεις, μπορεί να εμφανιστεί μικρή ποσότητα πρωτεΐνης στα ούρα σε υγιή άτομα μετά την κατάποση μιας μεγάλης ποσότητας πρωτεϊνικών τροφών, ως αποτέλεσμα της ψύξης, με συναισθηματικό στρες, παρατεταμένη σωματική άσκηση (η αποκαλούμενη πρωτεϊνουρία κατά την πορεία).

Η εμφάνιση σημαντικής ποσότητας πρωτεΐνης στα ούρα (πρωτεϊνουρία) είναι μια παθολογία. Η αιτία της πρωτεϊνουρίας μπορεί να είναι η νεφρική νόσο (οξεία και χρόνια σπειραματονεφρίτιδα, πυελονεφρίτιδα, εγκυμοσύνη νεφροπάθεια, κ.λπ.) ή ουροφόρος οδός (φλεγμονή της ουροδόχου κύστης, προστάτη, ουρητήρες). Η νεφρική πρωτεϊνουρία μπορεί να είναι οργανική (σπειραματική, σωληνοειδής και περίσσεια) και λειτουργική (εμπύρετη πρωτεϊνουρία, ορθοστατική στους εφήβους, όταν τρώνε βρέφη σε νεογνά). Η λειτουργική πρωτεϊνουρία δεν σχετίζεται με τη νεφρική παθολογία. Η ημερήσια ποσότητα πρωτεΐνης ποικίλει σε ασθενείς από 0,1 έως 3,0 g ή περισσότερο. Η σύνθεση πρωτεϊνών ούρων προσδιορίζεται με ηλεκτροφόρηση. Η εμφάνιση στα ούρα της πρωτεΐνης Bens-Jones είναι χαρακτηριστική του μυελώματος και της βακτηριοσφαιριναιμίας Waldenstrom, # 223 · 2 μικροσφαιρίνες σε περίπτωση βλάβης στα νεφρικά σωληνάρια.

Η κανονική πρωτεΐνη στα ούρα είναι σχεδόν απουσία (λιγότερο από 0,002 g / l).

Τα κύρια σημεία της ασθένειας που εντοπίστηκαν στη μελέτη των ούρων.

SG Ειδικό βάρος. Μείωση του ειδικού βάρους υποδηλώνει μείωση της ικανότητας των νεφρών να συγκεντρώνουν τα ούρα και να εκκρίνουν τοξίνες από το σώμα, όπως συμβαίνει με τη νεφρική ανεπάρκεια. Η αύξηση του ειδικού βάρους συνδέεται με μια μεγάλη ποσότητα σακχάρου στα ούρα, τα άλατα. Θα πρέπει να σημειωθεί ότι είναι αδύνατο να εκτιμηθεί το ειδικό βάρος για μία μόνο δοκιμασία ούρων, μπορεί να υπάρξουν τυχαίες αλλαγές, είναι απαραίτητο να εκτελεστεί εκ νέου 1-2 φορές η ανάλυση ούρων.

Πρωτεΐνη πρωτεΐνης στα ούρα - πρωτεϊνουρία. Η αιτία της πρωτεϊνουρίας μπορεί να είναι η βλάβη των ίδιων των νεφρών στη νεφρίτιδα, η αμυλοείδωση και η βλάβη από τα δηλητήρια. Η πρωτεΐνη στα ούρα μπορεί επίσης να εμφανιστεί λόγω ασθενειών του ουροποιητικού συστήματος (πυελονεφρίτιδα, κυστίτιδα, προστατίτιδα).

Γλυκόζη Γλυκόζη (ζάχαρη) στα ούρα - γλυκοζουρία - συχνότερα λόγω του διαβήτη. Μια πιο σπάνια αιτία είναι η ήττα των νεφρικών σωληναρίων. Είναι πολύ ενοχλητικό αν εντοπιστούν σώματα κετονών μαζί με ζάχαρη στα ούρα. Αυτό συμβαίνει με τον σοβαρό, μη ευθυγραμμισμένο διαβήτη και αποτελεί προάγγελο των πιο σοβαρών επιπλοκών του διαβήτη - διαβητικό κώμα.

Χολερυθρίνη, Urobilinogen Η χολερυθρίνη και η ουροβιλίνη προσδιορίζονται στα ούρα σε διάφορες μορφές ίκτερου.

Ερυθροκύτταρα Ερυθροκύτταρα στα ούρα - αιματουρία. Αυτό συμβαίνει είτε με την ήττα των ίδιων των νεφρών, συνήθως με τη φλεγμονή τους, είτε με ασθενείς με ασθένειες του ουροποιητικού συστήματος. Εάν, για παράδειγμα, μια πέτρα κινείται κατά μήκος τους, μπορεί να τραυματίσει την βλεννογόνο, θα υπάρχουν ερυθρά αιμοσφαίρια στα ούρα. Ένας νεφρωστικός όγκος που καταστρέφει μπορεί επίσης να οδηγήσει σε αιματουρία.

Λευκοκύτταρα Λευκοκύτταρα στα ούρα - λευκοκυτταρία, πιο συχνά το αποτέλεσμα φλεγμονωδών αλλαγών στην ουροδόχο κύστη σε ασθενείς με πυελονεφρίτιδα, κυστίτιδα. Τα λευκοκύτταρα συχνά προσδιορίζονται από τη φλεγμονή των γυναικείων εξωτερικών γεννητικών οργάνων, στους άνδρες, από τη φλεγμονή του αδένα του προστάτη.

Κύλινδροι Κύλινδροι είναι ιδιόμορφες μικροσκοπικές δομές. Οι κυλίνδρους υαλίνης σε ποσότητα 1-2 μπορούν να είναι σε ένα υγιές άτομο. Αυτά σχηματίζονται στα νεφρικά σωληνάρια, κολλούν μαζί πρωτεϊνικά σωματίδια. Όμως, η αύξηση του αριθμού τους, οι κύλινδροι άλλων τύπων (κοκκώδες, ερυθροκύτταρο, λίπος) υποδεικνύουν πάντοτε τη ζημία του ίδιου του ιστού των νεφρών. Υπάρχουν κύλινδροι σε φλεγμονώδεις νόσους των νεφρών, μεταβολικές αλλοιώσεις, όπως ο διαβήτης.

Ενημερωτική μέθοδος και τα όριά της. Το πληροφοριακό περιεχόμενο της γενικής δοκιμασίας ούρων για την αναγνώριση συγκεκριμένων ασθενειών των νεφρών είναι χαμηλό, συνήθως απαιτεί πρόσθετες ακριβέστερες μελέτες. Ωστόσο, η έρευνα είναι πολύ σημαντική, ιδιαίτερα κατά τη διεξαγωγή προληπτικών μελετών, καθώς επιτρέπει τον εντοπισμό πρώιμων σημείων νεφρικής νόσου. Είναι επίσης γνωστό ότι συχνά η νεφρική νόσο εμφανίζεται κρυμμένη και μόνο μια μελέτη των ούρων τους επιτρέπει να υποπτεύονται και να διεξάγουν περαιτέρω αναγκαία εξέταση.

Στα περισσότερα εργαστήρια, όταν εξετάζονται ούρα για πρωτεΐνες, χρησιμοποιήστε πρώτα ποιοτικές αντιδράσεις που δεν ανιχνεύουν πρωτεΐνες στα ούρα ενός υγιούς ατόμου. Εάν η πρωτεΐνη στα ούρα ανιχνεύεται με ποιοτικές αντιδράσεις, πραγματοποιείται ποσοτικός (ή ημι-ποσοτικός) προσδιορισμός. Ταυτόχρονα, τα χαρακτηριστικά των χρησιμοποιούμενων μεθόδων που καλύπτουν ένα διαφορετικό φάσμα ουροπρωτεϊνών είναι σημαντικά. Έτσι, όταν προσδιορίζεται η πρωτεΐνη χρησιμοποιώντας 3% σουλφοσαλικυλικό οξύ, η ποσότητα της πρωτεΐνης θεωρείται φυσιολογική έως 0,03 g / l, ενώ χρησιμοποιώντας τη μέθοδο pyrogallol, το όριο των φυσιολογικών πρωτεϊνικών τιμών αυξάνεται σε 0,1 g / l. Από την άποψη αυτή, στη μορφή ανάλυσης είναι απαραίτητο να αναφερθεί η κανονική τιμή της πρωτεΐνης για τη μέθοδο που χρησιμοποιείται από το εργαστήριο.

Κατά τον καθορισμό των ελάχιστων ποσοτήτων πρωτεϊνών, συνιστάται η επανάληψη της ανάλυσης · ​​σε περίπτωση αμφιβολίας, πρέπει να προσδιορίζεται η ημερήσια απώλεια πρωτεΐνης στα ούρα. Τα κανονικά καθημερινά ούρα περιέχουν πρωτεΐνες σε μικρές ποσότητες. Υπό φυσιολογικές συνθήκες, η φιλτραρισμένη πρωτεΐνη απορροφάται σχεδόν πλήρως από το επιθήλιο των εγγύς σωληναρίων και η περιεκτικότητά της στην καθημερινή ποσότητα ούρων ποικίλει ανάλογα με τους διαφορετικούς συγγραφείς από ίχνη μέχρι 20 50, 80 100 mg και ακόμη και έως 150 200 mg. Μερικοί συγγραφείς πιστεύουν ότι η καθημερινή απέκκριση πρωτεΐνης σε ποσότητα 30 50 mg / ημέρα είναι ο φυσιολογικός κανόνας για έναν ενήλικα. Άλλοι πιστεύουν ότι η απέκκριση πρωτεϊνών στα ούρα δεν πρέπει να ξεπερνά τα 60 mg / m2 σωματικής επιφάνειας ανά ημέρα, εξαιρουμένου του πρώτου μήνα ζωής, όταν η τιμή της φυσιολογικής πρωτεϊνουρίας μπορεί να είναι τέσσερις φορές υψηλότερη από τις καθορισμένες τιμές.

Η γενική κατάσταση για την εμφάνιση πρωτεϊνών στα ούρα ενός υγιούς ατόμου είναι η μάλλον υψηλή συγκέντρωσή τους στο αίμα και το μοριακό βάρος όχι περισσότερο από 100.200 kDa.

αυτό δεν είναι ο κανόνας, με τη διάγνωση σας είναι πιθανό, άλλο είναι ότι για το νεφρωσικό σύνδρομο είναι στην πραγματικότητα ένας μικρός δείκτης.. κοιτάξτε την κλινική - πρήξιμο, πίεση, κλπ., συνεχίστε να παίρνετε τη συνταγογραφούμενη θεραπεία.

και όμως θα πω: είναι φυσιολογικό να μην είναι!